蘭州鲇微衛(wèi)星多態(tài)性及生長(zhǎng)相關(guān)基因分析.pdf

1、蘭州鲇(Silurus lanzhouensis)，又名黃河鯰，是黃河中上游特有的優(yōu)質(zhì)經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)，因其肉質(zhì)細(xì)嫩、刺多肉少、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高等優(yōu)點(diǎn)，深受養(yǎng)殖戶(hù)和消費(fèi)者的喜愛(ài)，市場(chǎng)需求量大，消費(fèi)市場(chǎng)前景廣闊。但是目前蘭州鲇野生種群數(shù)量日益減少，養(yǎng)殖群體選育程度較低。鑒于此，本研究采用EST-SSR標(biāo)記技術(shù)開(kāi)展蘭州鲇遺傳多樣性研究;運(yùn)用基因克隆技術(shù)開(kāi)展蘭州鲇核糖體蛋白質(zhì)L15(RPL15)基因完整CDS區(qū)、生肌決定因子Myf5（Myf5）基因部分CD

2、S區(qū)生物信息學(xué)分析，同時(shí)采用實(shí)行熒光定量法分析上述兩個(gè)基因在蘭州鲇8個(gè)不用組織、不同性別個(gè)體間的表達(dá);采用TA克隆和單鏈構(gòu)象多態(tài)性的方法，分析蘭州鲇生肌決定因子MyoD(MyoD)基因、肌細(xì)胞生成素MyoG(MyoG)基因的SNPs和多態(tài)性，篩選出與生長(zhǎng)有關(guān)的標(biāo)記位點(diǎn)。通過(guò)以上研究為今后蘭州鲇分子標(biāo)記輔助選育和基因工程育種技術(shù)奠定了一定的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐，并取得以下研究結(jié)果:
　　試驗(yàn)一:獲得218個(gè)EST-SSR序列，GenB

3、ank登錄號(hào):JZ84579-JZ845687;JZ845227-JZ845367;81個(gè)不含SSR的EST序列，GenBank登錄號(hào):JZ845478-JZ84559。根據(jù)側(cè)翼序列設(shè)計(jì)出299對(duì)引物，選取53對(duì)進(jìn)行擴(kuò)增檢驗(yàn)，有22對(duì)引物可擴(kuò)增出目的條帶，用PAGE-銀染法在100尾蘭州鲇個(gè)體間進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)11個(gè)EST-SSR位點(diǎn)具有多態(tài)性。
　　試驗(yàn)二:首次克隆測(cè)序獲得蘭州鲇RPL15基因的完整CDS區(qū)序列長(zhǎng)度為615b

4、p(GenBank登錄號(hào):KT1969343)和My f5基因的部分cDNA序列長(zhǎng)度為477 bp(GenBank登錄號(hào):KT580948)。RPL15基因編碼由355個(gè)氨基酸殘基組成的可溶堿性蛋白質(zhì)。通過(guò)熒光定量PCR分析蘭州鲇RPL15基因主要在腦組織和肝組織中特異性表達(dá)，且腦組織和肝組織極顯著的高于其它組織(P＜0.01)。腦組織RPL15的表達(dá)雌魚(yú)顯著高于雄魚(yú)(P＜0.05)。
　　蘭州鲇Myf5基因編碼由122個(gè)氨基酸殘

5、基組成的可溶酸性蛋白質(zhì)。蘭州鲇Myf5基因主要在肌肉組織中特異性表達(dá);雌雄異體間的表達(dá)，肌肉組織Myf5的表達(dá)雄魚(yú)顯著高于雌魚(yú)(P＜0.05)。
　　試驗(yàn)三:MyoD基因僅在第1外顯子中發(fā)現(xiàn)1處突變G250A。MyoD有3種基因型(AA、BB和AB)。體重、體高表型值以AB基因型的為最高，以BB基因型的為最低，且3種基因型所對(duì)應(yīng)的表型值組間差異顯著(P＜0.05)。體長(zhǎng)表型值在3種基因型中表現(xiàn)出AA＞AB＞BB的關(guān)系，且不同基因型