肝癌相關(guān)分子的蛋白質(zhì)組學(xué)研究及HSP27的功能驗證.pdf

1、F 7 6 8 9 5 3飯 旦大學(xué)’- } 疊f l 『| r 1 I I c 1 2 4 ( ，1 7 ’ r ；0 2 1I c 1 4 ( ] t博士學(xué)位淪文肝癌相關(guān)分子的蛋白質(zhì)組學(xué)研究及H S P 2 7 的功能驗證眥#姚系業(yè)“指廿教| J 1 | j覓成I J 蚓I k l 皖卟物化。j 1 0 分j ，乍物‘7爪海北劉鉞帥教授媾L 論文 肝痛相關(guān)分F 的蛋臼質(zhì)紐學(xué)研究及H S P 2 7 的功能驗證肝癌相關(guān)分子的蛋白質(zhì)組學(xué)

2、研究及H S P 2 7 的功能驗證中文詳細摘要肝癌是診治困難、預(yù)后極差的一種惡性腫瘤，全球肝癌發(fā)病率、病死率均位居各腫瘤前列，轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)是影響肝細胞性肝癌( h u m a n h e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a ，H C C ) 術(shù)后生存的最大障礙。肝癌的發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)均是多因素參與的多環(huán)節(jié)的病理過程，傳統(tǒng)的單基因研究模式限制了肝癌相關(guān)因素的研究發(fā)展。近年來迅速發(fā)展的蛋白質(zhì)組

3、學(xué)研究，能動態(tài)、整體、定量地考察疾病發(fā)生發(fā)展過程中全部蛋白質(zhì)種類和數(shù)量的變化，對于探討疾病機理、尋找疾病診斷的特異性標(biāo)志物和藥物治療的靶標(biāo)來說，是一種有效的高通量的研究模式，可獲得一些傳統(tǒng)手段無法得到的新蛋白標(biāo)志物、新關(guān)鍵分子，極大地豐富診斷標(biāo)志物的選擇組合及復(fù)雜致病視理的全面闡明。運用該研究策略，本研究通過對轉(zhuǎn)移和非轉(zhuǎn)移入肝細胞性肝癌組織、肝癌與癌旁組織的全蛋白質(zhì)組表達譜差異分析，篩選出一些有潛在應(yīng)用價值的差異蛋白質(zhì)，并對其中的差異分

4、予H S P 2 7 在肝癌組織和肝癌細胞系中進行驗證，同時采用R N A 干擾技術(shù)以及與癌發(fā)生、侵襲等生物學(xué)特性有關(guān)的鑒定方法對H S P 2 7 進行了功能分析。第一部分人肝細胞性肝癌組織轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究本部分的研究目的是應(yīng)用雙向凝膠電泳( t w o ．d i m e n s i o n a le l e c t r o p h o r e s i s ，2 ．D E ) 結(jié)合基質(zhì)輔助的激光解吸離子化一飛行時間質(zhì)譜( m

5、a t r i xa s s i s t e d l a s e rd e s o r p t i o n ／i o n i z a t i o n - t i m eo f f l i g h tm a s ss p e c t r o m e t r y ，M A L D I —T O F —M S ) 等蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，對臨床和病理上均發(fā)現(xiàn)有轉(zhuǎn)移的H C C 組織和未發(fā)生轉(zhuǎn)移的H C C組織的全蛋白質(zhì)差異表達譜進行分析，篩查在轉(zhuǎn)移

6、過程中發(fā)揮重要作用的差異蛋白分子。選擇在臨床和病理上提示有轉(zhuǎn)移和未發(fā)生轉(zhuǎn)移的肝細胞癌組織各6 例，提取肝癌組織總蛋白，應(yīng)用非線性p H 3 ～1 0 ，長2 4 c m 的固定p H 梯度的I P G 膠條和1 2 ．5 ％的S D S ．P A G 進行雙向凝膠電泳分離總蛋白，每一例樣本均分別進行2次雙向電泳以保證重復(fù)性，用I m a g e M a s t e r 軟件對兩組的全蛋白質(zhì)組表達譜進行差異分析。結(jié)果在相同條件下，轉(zhuǎn)移組(