腎康丸治療早期糖尿病腎病的臨床實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、一、立論依據(jù) DN的發(fā)病機(jī)制至今尚不清楚。隨著分子生物學(xué)水平研究的不斷進(jìn)步，對(duì)糖尿病性腎病的病理變化及其相關(guān)的多種因素進(jìn)行的研究取得了明顯的進(jìn)步，研究提示可能是由于糖代謝紊亂及其所導(dǎo)致的血流動(dòng)力學(xué)改變、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等多種因素綜合作用的結(jié)果，涉及多因素、多環(huán)節(jié)。目前認(rèn)為，遺傳易感性及高血糖(環(huán)境因素)是DN發(fā)生的啟動(dòng)因素，它們之間的相互作用導(dǎo)致DN的發(fā)生發(fā)展。在這些因素與腎臟最終的病理改變之間，起中介作用的可能是各種細(xì)胞因子

2、。特別是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、血小板衍化生長(zhǎng)因子的表達(dá)過(guò)多，都是發(fā)病的關(guān)鍵。 近年來(lái)細(xì)胞因子在糖尿病腎病發(fā)病中的作用越來(lái)越得到人們的關(guān)注。細(xì)胞因子在體內(nèi)通過(guò)自分泌、旁分泌、內(nèi)分泌途徑，在血糖、糖基化終末產(chǎn)物、蛋白激酶C活性、血管活性因子、血流動(dòng)力學(xué)改變等因素調(diào)控下，相互影響，相互制約，構(gòu)成了糖尿病腎病發(fā)病過(guò)程中復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，其中以轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1為核心因子。 另外，氧化自由基、非酶糖基化和過(guò)氧化等脂代謝障礙，高血壓，組織

3、缺氧及吸煙等，均在DN發(fā)病中起到一定作用。 近年來(lái)由于DN發(fā)病率有增高的趨勢(shì)，而目前該病西醫(yī)尚缺乏理想的治療方法，因此積極探索中醫(yī)藥治療DN的有效方法將是關(guān)注的熱點(diǎn)。雖然現(xiàn)在國(guó)內(nèi)外對(duì)中藥治療DN的臨床療效觀察和經(jīng)驗(yàn)報(bào)道較多，療效機(jī)制的研究也取得部分成績(jī)，但仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能解釋中藥(尤其是復(fù)方)復(fù)雜的療效機(jī)制。 糖尿病腎病與中醫(yī)“消渴”中的腎消有關(guān)，自古醫(yī)家多認(rèn)為是肺、脾、腎三臟虧虛而致，陰虛為本，燥熱為標(biāo)是其基本病機(jī)，并貫穿于

4、疾病發(fā)生、發(fā)展的全過(guò)程。該文認(rèn)為久病多耗氣傷陰，累及脾腎，導(dǎo)致脾腎虧虛，氣陰兩傷，氣虛血行無(wú)力，病久入絡(luò)，易致血行瘀滯，故多兼夾瘀血阻絡(luò)之證。脾虛清陽(yáng)不升，失于健運(yùn)，水谷精微之氣無(wú)以化生，腎虛固攝無(wú)權(quán)，精微持續(xù)下注，失于流暢而外泄，則可出現(xiàn)蛋白尿。因此，在治療上以益氣健脾、滋腎養(yǎng)陰兼活血通絡(luò)為主。 二、研究?jī)?nèi)容 該課題從臨床和實(shí)驗(yàn)方面入手。先從臨床選取一批早期DN患者，通過(guò)觀察患者血脂、過(guò)氧化物、一氧化氮、腎功能、尿白蛋

5、白排泄量等分析腎康丸的臨床治療作用；第二步用血清藥理學(xué)方法觀察腎康丸對(duì)早期DN大鼠系膜細(xì)胞的增殖變化的影響、檢測(cè)腎康丸對(duì)系膜細(xì)胞分泌一氧化氮(NO)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子的影響；第三步觀察腎康丸對(duì)早期DN大鼠一般情況、脂質(zhì)代謝、氧化應(yīng)激等方面的影響，并用光鏡和電鏡從形態(tài)學(xué)上觀測(cè)大鼠的腎臟病理變化；最后用分子生物學(xué)方法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子的蛋白相對(duì)含量、免疫組化方法對(duì)腎臟轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子半定量去分析腎康丸對(duì)早期DN大鼠腎臟的治療保護(hù)機(jī)制，初步揭示中醫(yī)藥治

6、療DN的可能作用機(jī)制和治療機(jī)理，充分體現(xiàn)中醫(yī)藥治療DN的優(yōu)勢(shì)。 三、方法與結(jié)果 方法： 1、臨床選取一批適合標(biāo)準(zhǔn)的早期DN患者，在有效控制血糖的基礎(chǔ)上，隨機(jī)分為腎康丸治療組和開(kāi)搏通治療組，連續(xù)治療6-12周后，觀察患者尿白蛋白排泄量、血糖、血脂、過(guò)氧化物、一氧化氮、肝功、腎功能等指標(biāo)。 2、用STZ一次性腹腔注射法建立大鼠早期DN模型，無(wú)菌取腎，分離腎小球系膜細(xì)胞培養(yǎng)，將細(xì)胞生長(zhǎng)控制在G0期后，分別加入腎

7、康丸大、中、小劑量藥物血清、開(kāi)搏通藥物血清及正常大鼠血清，觀察細(xì)胞形態(tài)，并將細(xì)胞分別培養(yǎng)12、24、48小時(shí)后取培養(yǎng)上清液用分光光度計(jì)分別檢測(cè)增值情況、NO與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子的分泌情況。 3、同樣用STZ一次性腹腔注射法建立大鼠早期DN模型，設(shè)早期DN模型組、腎康丸治療組和開(kāi)搏通治療組，同時(shí)設(shè)正常對(duì)照組，治療4周后。觀察治療期間及治療后大鼠一般狀況(精神狀態(tài)、飲食、毛色、體重增輻、尿量、飲水量等)，治療后血糖、糖化血紅蛋白、尿糖、2

8、4h尿蛋白、24h尿白蛋白分泌率、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、腎重、相對(duì)腎重、血脂(膽固醇、甘油三脂)、NO、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的變化，腎臟作光鏡及透射電鏡檢查。 4、設(shè)早期DN模型組、腎康丸治療組和開(kāi)搏通治療組，同時(shí)設(shè)正常對(duì)照組，分別在治療2周和4周后取腎組織用RT-PCR方法和免疫組化方法檢測(cè)腎臟細(xì)胞因子TGF-β1相對(duì)含量，同時(shí)用ELISA試劑盒檢測(cè)大鼠尿TGF-β1含量與尿白蛋白排泄率。

9、 結(jié)果： 1、在有效控制血糖的基礎(chǔ)上，腎康丸組治療總有效率92.5％，開(kāi)搏通組總有效率72.5％，兩組之間比較，腎康丸組明顯優(yōu)于開(kāi)搏通組(P＜0.05)。腎康丸能明顯降低患者尿白蛋白排泄量；提高患者血清中NO水平；提高患者血清中SOD的含量，有效清除氧自由基；降低血膽固醇、甘油三脂。未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用。 2、模型大鼠血糖均大于13.8mmol/L，尿糖++～++++，尿蛋白試紙陰性，尿白蛋白排泄量增高與正常組比較有顯

10、著性差異(P＜0.01)，尿量明顯增多；模型組大鼠癥狀可見(jiàn)精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，動(dòng)作遲緩，毛發(fā)豎立無(wú)光澤，弓背蜷體，尿量增多，飲水、進(jìn)食量增加明顯。腎臟切片在光鏡下見(jiàn)大部分腎小球明顯增大、腫脹、出血，GBM增厚，部分腎小球系膜細(xì)胞增生，系膜增寬，腎小管出現(xiàn)小管細(xì)胞肥大、空泡變性，未見(jiàn)明顯的腎小球硬化。 3、腎康丸藥物大、中、小劑量組血清與正常血清組比較能明顯抑制早期DN大鼠MC增殖，均能抑制腎小球MC分泌TGF-β1，促進(jìn)早期DN

11、大鼠腎小球MC分泌NO(P＜0.01)，而且這些作用隨用藥時(shí)間及藥物濃度的升高而增強(qiáng)。 4、腎康丸首先能有效改善早期DN大鼠的一般狀態(tài)，減輕腎臟肥大，減輕腎臟病理改變程度；與模型組比較，能顯著降低早期DN大鼠尿蛋白、尿微量白蛋白的排泄率(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠腎組織和血清NO含量明顯下降(P＜0.01)；腎康丸、開(kāi)搏通治療組的血與腎組織NO含量明顯升高，雖不及正常組，但具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，腎康丸組、開(kāi)搏通組與模型組比較具有

12、顯著性差異(P＜0.05)。腎康丸組血脂情況與模型組比較也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。模型組大鼠腎組織和血清有明顯的SOD活性下降(P＜0.01)，MDA值增高的現(xiàn)象(P＜0.01)。腎康丸治療組的血與腎組織SOD活性均明顯升高，MDA含量下降，但仍不及正常組，卻具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。開(kāi)搏通組稍具升高SOD活性和降低MDA的作用，但與模型組比較無(wú)顯著性差異。 5、模型組尿TGF-β1、腎組織TGF-β1蛋白及TGF

13、-β1mRNA表達(dá)均高于正常組(P＜0.01)，腎康丸組治療后尿TGF-β1、TGF-β1蛋白及TGF-β1mRNA表達(dá)均明顯低于模型組(P＜0.01)。 四、結(jié)論 1、有效控制血糖的基礎(chǔ)上，臨床上腎康丸對(duì)早期糖尿病腎病患者有較好的治療保護(hù)作用。 2、腎康丸大、中、小劑量組能明顯抑制早期糖尿病腎病模型大鼠腎小球系膜細(xì)胞的增殖，抑制系膜細(xì)胞對(duì)細(xì)胞因子TGF-β1的分泌，促進(jìn)系膜細(xì)胞對(duì)NO分泌，呈明顯時(shí)效和量效關(guān)系。

14、 3、腎康丸可改善早期糖尿病腎病大鼠一般狀態(tài)；減輕腎臟肥大，對(duì)腎臟病理?yè)p害也有一定程度的保護(hù)作用；顯著降低尿蛋白、尿白蛋白排泄率；可明顯降低膽固醇、甘油三脂，改善脂質(zhì)代謝；明顯提高早期糖尿病腎病大鼠血清及腎組織的NO含量，并可能提高NO活性、抑制過(guò)氧化亞硝基陰離子(ONOO-)產(chǎn)生；可明顯提高早期糖尿病腎病大鼠血清及腎組織的SOD含量，降低MDA的含量，提示腎康丸可通過(guò)清除氧自由基，減輕氧化應(yīng)激對(duì)腎臟的損害。 4、腎康丸