雙乙酸鈉和曲酸對關中黑豬精液常溫保存效果的研究.pdf

1、稀釋粉質量決定了公豬精液稀釋后、人工授精前的質量，繼而影響輸精后母豬的繁殖成績。由于精液受到細菌的污染是無法避免的，細菌的增殖會對精液保存造成不利影響;同時精子在保存和運輸過程中產(chǎn)生的活性氧(ROS)和抗氧化劑之間的不平衡誘導的氧化應激(OS)狀態(tài)能夠損傷精子，因此稀釋粉中添加抑菌劑和抗氧化劑是常規(guī)選擇。目前市場上用于常溫保存豬精液的稀釋粉主要是針對瘦肉型豬種研發(fā)的，對于關中黑豬等培育品種的研究很少。本研究將抑菌劑雙乙酸鈉(SDA)和抗

2、氧化劑曲酸(Kojic acid)應用到關中黑豬精液的常溫保存中，通過抑菌性試驗、精子活率、質膜完整率、線粒體完整性、頂體完整率和總抗氧化能力(T-AOC)等指標檢測，探究SDA替代慶大霉素的可行性和曲酸對精子的保護作用，為關中黑豬精液稀釋粉的研發(fā)提供技術支持。本研究主要獲得以下結果:
　　1.關中黑豬精液稀釋保存過程中檢測到的細菌超過100種，保存初期精液中細菌以革蘭氏陽性菌居多:葡萄球菌科(Staphylococcus)24.

3、13％、鏈球菌科(Streptococcus)13.39％、氣球菌科(Aerococcaceae）11.84％和芽孢桿菌科(Bacillaceae)6.91％等;隨保存時間延長，革蘭氏陰性菌以腸桿菌科Enterobacteriaceae）為主的比例上升，到第5d占絕大部分(97.76％);
　　2.雙乙酸鈉對大腸桿菌(Escherichia coli)具有一定的抑制作用，但抑菌效果不如慶大霉素。在LB固體培養(yǎng)基中雙乙酸鈉對魯菲不動

4、桿菌(Acinetobacter lwoffii)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌圈直徑大小隨濃度增大而顯著增大;在分別加有魯菲不動桿菌和金黃色葡萄球菌的LB液體培養(yǎng)基中，其OD值隨雙乙酸鈉濃度增大而顯著降低。較高濃度(＞0.8 g/L)雙乙酸鈉對魯菲不動桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制效果與慶大霉素相近;
　　3.添加濃度高于0.2 g/L的雙乙酸鈉對稀釋后精液的滲透壓有顯著影響。BTS液中添加0～

5、0.8g/L雙乙酸鈉對精液保存效果呈先增后減的變化。單獨添加0.2 g/L雙乙酸鈉保存至第5d時，能有效抑制細菌生長，提高精子活率、質膜、頂體和線粒體完整性。BTS液中添加高濃度(＞1g/L)的雙乙酸鈉不利于關中黑豬精子保存;
　　4.BTS液中添加0.2 g/L雙乙酸鈉替代40％的慶大霉素能夠達到等同于250 mg/L慶大霉素對精液的保存效果;
　　5.BTS液中添加0.1 g/L濃度以內的曲酸能夠有效提高精子質膜、頂體完

6、整性，提升精子的總抗氧化能力。其中0.04 g/L濃度組保存效果最好，保存第5d時精子活率為61.45％，可將精子有效保存時間延長2d，0.06 g/L濃度組與之差異不顯著;
　　6.不同濃度雙乙酸鈉+曲酸組合整體上相對于空白對照組有利于關中黑豬精子的保存，對活率、頂體完整率均有提高作用，但二者聯(lián)合使用沒有顯著的增益效果。
　　綜上所述，關中黑豬精液常溫保存過程中出現(xiàn)的細菌中革蘭氏陰性菌呈遞增趨勢，其中腸桿菌科Enterob