非霍奇金淋巴瘤骨髓浸潤(rùn)患者p73 mRNA基因表達(dá)及甲基化研究.pdf

1、研究背景及目的：研究表明p73基因作為p53基因家族成員之一，在淋巴造血系統(tǒng)腫瘤中發(fā)揮抑癌基因作用，腫瘤組織中多為低表達(dá)或表達(dá)缺失。并且認(rèn)為該基因的異常表達(dá)與基因啟動(dòng)子、外顯子區(qū)CpG島的高甲基化有關(guān)，而非基因突變的結(jié)果。但研究結(jié)論多來源于細(xì)胞系和急性淋巴細(xì)胞白血病資料，涉及惡性淋巴瘤的研究甚少。非霍奇金淋巴瘤(NHL)作為惡性淋巴瘤(ML)的絕大部分，骨髓浸潤(rùn)(BMI)者臨床多見，病情重，發(fā)展快，治療反應(yīng)差，預(yù)后不佳。本實(shí)驗(yàn)研究p73

2、基因mRNA在非霍奇金淋巴瘤骨髓浸潤(rùn)標(biāo)本中的表達(dá)及患者p73基因表達(dá)缺失與DNA啟動(dòng)子序列甲基化的關(guān)系。旨在探討p73 mRNA基因表達(dá)缺失的影響因素、p73 mRNA表達(dá)與臨床治療反應(yīng)的關(guān)系以及非霍奇金淋巴瘤骨髓浸潤(rùn)發(fā)生發(fā)展的可能分子生物學(xué)機(jī)制。 方法： 1.病例資料經(jīng)臨床、細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查及細(xì)胞表面抗原標(biāo)志檢查符合NHL診斷的患者28例，男16例，女12例。平均年齡41歲。其中淋巴瘤細(xì)胞白血病(LMCL)7例；B-N

3、HL13例，T-NHL 15例。同期取骨髓形態(tài)學(xué)檢查非腫瘤對(duì)照者骨髓8例作為正常對(duì)照。 2.實(shí)驗(yàn)方法按常規(guī)方法分別采集研究對(duì)象骨髓血，分離單個(gè)核細(xì)胞，應(yīng)用TRIZOL試劑抽提總RN,A，用M-MLV(RNaseH)、隨機(jī)引物反轉(zhuǎn)錄cDNA第一鏈，根據(jù)NCBI提供基因序列設(shè)計(jì)并合成引物，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)，以看家基因β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)為內(nèi)參對(duì)照，擴(kuò)增p73基因序列片斷。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)

4、擴(kuò)增產(chǎn)物p73基因mRNA的表達(dá)情況。試劑盒法提取髓血DNA，采用甲基化敏感的限制性內(nèi)切酶酶切聯(lián)合多聚酶鏈反應(yīng)方法(REP法)，分別以未酶切DNA、甲基化敏感酶HapⅡ酶切DNA、甲基化不敏感酶MspI酶切DNA標(biāo)本為模板，擴(kuò)增p73基因部分啟動(dòng)子和第一外顯子序列，檢測(cè)其甲基化情況。結(jié)合患者的臨床資料分析治療反應(yīng)與p73mRNA表達(dá)的關(guān)系。 3.統(tǒng)計(jì)方法采用四格表資料Fisher角切概率法，分析骨髓浸潤(rùn)非霍奇金淋巴瘤與對(duì)照組p7

5、3 mRNA基因表達(dá)陽性率有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；同時(shí)采用相同統(tǒng)計(jì)方法，分析p73mRNA陰性表達(dá)NHL患者初治后總緩解率(RR)與p73mRNA陽性表達(dá)患者有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。采用非參數(shù)檢驗(yàn)(nonparametric test)Mann-Whitney U檢驗(yàn)法分析p73基因不同表達(dá)的兩組NHL患者間治療效果有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 1.p73基因表達(dá)缺失與非霍奇金淋巴瘤骨髓浸潤(rùn)的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。p73表達(dá)缺失的BMI非霍