吲哚醌抑制腎癌細(xì)胞生長(zhǎng)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：驗(yàn)證2，3吲哚醌對(duì)腎癌786-0細(xì)胞株有抗增殖、誘凋亡的作用；應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)初步探討2，3吲哚醌對(duì)腎癌786一0細(xì)胞株抗增殖、誘導(dǎo)凋亡作用的分子機(jī)制；旨在尋找抗腎癌的靶細(xì)胞藥物及位點(diǎn)。 材料和方法：實(shí)驗(yàn)所用腎癌細(xì)胞為腎癌786-0細(xì)胞株。1.增殖抑制實(shí)驗(yàn)：本實(shí)驗(yàn)采用MTT比色法及普通倒置顯微鏡下觀察法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，以濃度100～800μmol/L2，3-吲哚醌作用腎癌786-0細(xì)胞株24～72h后，觀

2、察藥物對(duì)腎癌細(xì)胞增殖的影響。2.細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)：本實(shí)驗(yàn)采用Hoechst33258熒光染色法觀察藥物作用后腎癌786-0細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變。3.差異蛋白實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別提取細(xì)胞裂解液，蛋白定量后采用WCX2芯片分析，應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)藥物作用前后蛋白質(zhì)表達(dá)的差異。 結(jié)果：MTT比色法證實(shí)，2，3-吲哚醌能顯著抑制腎癌細(xì)胞株786-0的體外增殖，其中在200-800μMol/L幾呈時(shí)間與劑量依賴性；普通倒

3、置顯微鏡下觀察顯示藥物作用后腎癌細(xì)胞株786-0細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，未見(jiàn)明顯增殖；Hoechst33258熒光染色證實(shí)，經(jīng)2，3-吲哚醌作用后的腎癌細(xì)胞株786-0細(xì)胞核周圍出現(xiàn)凋亡小體；應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，WCX2芯片共捕獲56個(gè)蛋白峰，其中藥物作用組與對(duì)照組之間比較有4個(gè)明顯的差異蛋白峰，其中在藥物組有3個(gè)特異性高表達(dá)峰，1個(gè)特異性低表達(dá)峰。對(duì)不同濃度藥物作用組之間比較，未發(fā)現(xiàn)明顯的差異蛋白峰，僅發(fā)現(xiàn)蛋白峰強(qiáng)度有差別