兩種不同來源新城疫病毒的感染對雞免疫作用的分子機制.pdf

1、新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus，NDV)引起的一種發(fā)病急、致死率高的禽傳染病，在世界范圍內(nèi)廣為傳播，是危害養(yǎng)禽業(yè)最大的禽病之一。由于NDV有多個基因型，常規(guī)疫苗的免疫效果并不理想，新型疫苗的研制又總是落后于病原的變異。因此，深入了解家禽抗感染作用的天然免疫調(diào)控機制，提高禽機體的免疫能力，尋找抗NDV感染的新途徑顯得極為重要。禽β-防御素(Avian bet

2、a defensins，AvBDs)是富含陽離子的宿主防御肽，具有抗細菌、真菌以及病毒的活性，在禽先天性免疫及獲得性免疫中發(fā)揮著重要作用。
　　為探討禽β-防御素體內(nèi)對不同來源新城疫病毒的免疫調(diào)節(jié)作用機制，本試驗選用30只20日齡SPF雞，隨機分為三組，即對照組和兩組攻毒組。對照組不攻毒，攻毒組采用點眼滴鼻法分別接種雞源NDV強毒（F48E9病毒株）和鴨源NDV強毒(Md/CH/LGD/1/2005)。在攻毒后24 h后和48h，

3、每組各取出5只，分別采集雞腦、氣管、肺臟、腎臟、肝臟、腺胃、骨髓、脾臟、盲腸扁桃體、哈德氏腺、法氏囊組織。采用實時熒光定量RT-PCR法檢測攻毒前后各組織器官中的NDV病毒載量以及13種AvBDs、8種雞Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)、3種信號轉(zhuǎn)導分子、11種細胞因子基因的表達量。結(jié)果顯示:對照組各組織均未檢測到病毒。在感染兩種NDV后24h和48h，兩個攻毒組雞各組織均檢測到病毒，且在感染后48h，

4、各組織的病毒載量均高于感染后24 h各組織的病毒載量。在感染后48h，鴨源Md在各組織的表達量均高于雞源F48E9病毒株的表達量。與對照組相比，攻毒后雞AvBD2、3、4、5、6、9、10在大部分組織內(nèi)表達量均有不同程度的增加。其中，感染鴨源Md病毒株后48h，AvBD2在腎臟中的表達量顯著升高(P＜0.05)，AvBD5在肺臟中的表達顯著上調(diào)（P＜0.05）。同時發(fā)現(xiàn)，感染兩種NDV后，TLR2、3、4、7在肺臟和腎臟的表達量均增加，

5、感染鴨源Md病毒株后48 h，TLR2、3、4、7在肺臟中均顯著表達（P＜0.05）。感染兩種NDV后，MyD88在11種組織內(nèi)的表達均上調(diào)，而IRF-7和IFN-B均沒有明顯變化。感染鴨源Md病毒株后48h，IL-8、IFN-γ在肺臟中的表達量顯著增加（P＜0.05），在感染鴨源Md病毒株后24 h腎臟中IFN-γ的表達量以及在感染鴨源Md病毒株后24h和48 h腎臟中MHC classⅡ的表達量均顯著下調(diào)(P＜0.05)。本研究結(jié)果

6、顯示，機體受到NDV的感染后，可能通過啟動TLR2、4、7介導的MyD88以及TLR3介導的TRIF途徑，誘導AvBD2、5基因上調(diào)表達，同時刺激IL-8、IFN-γ以及MHC classⅡ基因的表達量發(fā)生變化，從而參加機體的對新城疫病毒的免疫反應。
　　為探討雞AvBDs是否具有直接抗NDV的作用，根據(jù)經(jīng)NDV感染后，雞組織中各AvBD表達變化，我們選擇雞AvBD2進一步研究雞AvBD的抗NDV病毒作用。通過細胞接種和雞胚接種試

7、驗測定重組雞AvBD2重組蛋白的體外NDV的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn):與對照組相比，經(jīng)重組蛋白中和后的病毒液接種細胞和雞胚，病毒含量均有降低趨勢，但差異不顯著，還需進一步的研究證明其體外抗NDV的作用。
　　綜上所述，NDV能夠誘導雞AvBD2、5基因的表達量顯著上調(diào)。機體受到NDV的感染后，可能通過啟動TLR2、4、7介導的MyD88以及TLR3介導的TRIF途徑，誘導AvBD2、5基因上調(diào)表達，同時刺激IL-8、IFN-γ以及MHC c