玻璃體腔內(nèi)注射VEGFSiRNA對(duì)小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成的抑制作用.pdf

1、本文通過(guò)在視網(wǎng)膜新生血管模型小鼠玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA的方法，探討是否能夠使用SiRNA來(lái)抑制視網(wǎng)膜新生血管的形成。 研究目的：在高氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管模型小鼠玻璃體內(nèi)注射一定量的VEGFSiRNA，觀察： 1、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA是否能夠有效地抑制視網(wǎng)膜新生血管的生成。 2、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA是否導(dǎo)致了視網(wǎng)膜組織生成VEGFmRNA明顯減少。 3、玻璃體內(nèi)注射VEGFSi

2、RNA是否會(huì)對(duì)小鼠眼球的生長(zhǎng)，發(fā)育產(chǎn)生影響以及引起其他不良反應(yīng)。 研究方法：選擇出生第七天的C57BL/6小鼠，將其在75％±3的氧氣中飼養(yǎng)5天后，再回到正常空氣中進(jìn)行飼養(yǎng)，其余條件不變。小鼠脫氧的同時(shí)在實(shí)驗(yàn)組使用微量進(jìn)樣器在小鼠眼球內(nèi)注射VEGFSiRNA，分為高劑量和低劑量組；并使用轉(zhuǎn)染試劑使VEGFSiRNA轉(zhuǎn)染效率提高。對(duì)照組給予no-silenceSiRNA和轉(zhuǎn)染試劑。在脫氧后5天，觀察角膜，晶體的透明度，摘除小鼠眼球

3、稱重。取一側(cè)眼球石蠟包埋制作病理切片進(jìn)行HE染色和VEGF免疫組化檢測(cè)，取另一側(cè)眼球視網(wǎng)膜組織進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)VEGFmRNA的表達(dá)水平，以觀察視網(wǎng)膜新生血管的情況和VEGFmRNA表達(dá)的情況。 研究結(jié)果： 1、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA對(duì)視網(wǎng)膜新生血管的生成影響。 HE染色和免疫組化結(jié)果和對(duì)照組相比，玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA，突破內(nèi)界膜生長(zhǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞顯著減少(P＜0.01)。表明新生血管生成減

4、少。高劑量和低劑量組間未見明顯差異。 2、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA對(duì)視網(wǎng)膜表達(dá)VEGFmRNA和VEGF的影響。 VEGFmRNA的A值比(吸光度比值)發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組顯著減少(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組中，高劑量和低劑量組間未見明顯差異。表明實(shí)驗(yàn)組VEGFmRNA表達(dá)比對(duì)照組明顯減少。VEGF免疫組化，內(nèi)皮細(xì)胞VEGF染色淡，VEGF染色陽(yáng)性細(xì)胞比率低。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組VEGF生成顯著減少(P＜0.01

5、)。 3、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA是否會(huì)影響小鼠眼球的生長(zhǎng)，發(fā)育以及其他不良反應(yīng)。 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組眼球重量無(wú)顯著差異，實(shí)驗(yàn)組小鼠眼球角膜，晶體透明。病理切片上未見明顯異常。 研究結(jié)論： 1、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA能抑制小鼠視網(wǎng)膜新生血管的生成。 2、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA導(dǎo)致了小鼠視網(wǎng)膜生成VEGFmRNA減少。 3、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA短期內(nèi)不會(huì)影響小鼠眼