阿魏酸鈉對在體大鼠心肌缺血-再灌注損傷的影響.pdf

1、心肌缺血再灌注損傷是急性心肌梗塞再通后出現(xiàn)的病理生理過程。近些年，隨著急性心梗各種血管開通技術(shù)的發(fā)展，人們對缺血再灌注損傷越來越重視，并做了大量的基礎(chǔ)及臨床研究。尋找有效地防治方法是目前面臨的難題。本實驗通過制作在體大鼠心梗模型進行模擬臨床急性心肌梗死再灌注治療，并通過觀察心律失常的改變及心肌組織丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)活性反映心肌受損的程度

2、，并分別檢測心肌組織NOS同功酶iNOS、cNOS。應(yīng)用阿魏酸鈉(Sodium ferulate，SF)干預(yù)，探討NOS系統(tǒng)在心肌缺血-再灌注損傷中的作用及SF對NOS系統(tǒng)的影響，為SF的心肌保護作用提供理論依據(jù)，為臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)藥理資料。 實驗材料和方法: 1．實驗動物及分組：采用3月齡健康雄性Wistar大鼠40只，體重180-250g，由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。適應(yīng)性喂養(yǎng)2天后心電圖正常者作為實驗對象。動物

3、隨機分為4組：假手術(shù)組、缺血再灌注組(MI/R)、阿魏酸鈉(SF)小劑量組按按20mg/kg給藥、阿魏酸鈉(SF)大劑量組按20mg/kg給藥。制作缺血再灌注模型用10％水合氯醛(0.3ml/kg)腹腔注射麻醉，氣管插管，接微型呼吸機(頻率50次/min，潮氣量1.5L/100mg)，四肢皮下插入針形電極記錄心電圖，并接心電監(jiān)護儀監(jiān)測心電變化。在胸骨左緣3.4肋間開胸，開瞼器拉開肋骨，暴露心臟，以動脈圓錐與左心耳之間的左冠狀靜脈為標(biāo)志，

4、在冠狀動脈左前降支(LAD)起始0.2cm處穿線，結(jié)扎之前在預(yù)結(jié)扎的冠狀動脈前降支處放置一根約0.5cm長直徑1.5mm的乳膠管，結(jié)扎左冠狀動脈前降支結(jié)扎10min，于結(jié)扎后5分鐘左心室心腔注射給藥。剪開結(jié)扎線即可實現(xiàn)再灌注，再灌注30min。結(jié)扎成功標(biāo)準(zhǔn)：心電圖Ⅱ?qū)?lián)ST段抬高、增寬。 2．測定指標(biāo)的方法：實驗開始時記錄心律失常發(fā)生率及心律失常持續(xù)時間。實驗完畢取心肌組織，制備10％組織勻漿應(yīng)用硫代巴比妥酸比色法(TBA)測定

5、丙二醛(MDA)含量及黃嘌呤氧化法測定SOD活性及NOS測定試劑盒進行測定iNOS、cNOS活性，蛋白濃度測定采用雙縮脲法。 3．實驗儀器和試劑：心電圖儀；多功能生理記錄儀；小動物呼吸機；壓力傳感器；冷光源；手術(shù)器械；天平；-20℃冰箱；-70℃度冰箱；低溫離心機；組織勻漿機；酶標(biāo)儀；阿魏酸鈉注射液由巴里莫爾制藥(通化)有限公司提供；丙二醛試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒購自南京建成生物工程研究所，TU21901雙光束紫外可見分光光

6、度計；數(shù)顯恒溫水浴鍋；NOS雙縮脲試劑盒購于南京建成生物工程研究所。 4．統(tǒng)計學(xué)處理：應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)以(x<'->±s)表示，組間的差異顯著性比較使用獨立樣本t檢驗。 實驗結(jié)果: MI/R組很快出現(xiàn)嚴(yán)重心律失常VT、VF發(fā)生率為100％；SF組心律失常出現(xiàn)的時間明顯延遲，心律失常持續(xù)時間明顯縮短．VT、VF發(fā)生率顯著減少。心肌組織MDA含量， SOD活性測定結(jié)果顯示，假手術(shù)組MDA含量最低為1

7、.553±0.88nmol/mgprot，而MI/R組MDA含量明顯升高，為2.982±1.131nmol/mgprot，經(jīng)SF干預(yù)后，MDA含量分別下降為2.400±0.726nmol/mgprot(20mg/kg組)和1.986±1.052nmol/mgprot(40mg/kg組)；其中SF小劑量組與MI/R組相比存在顯著性差異(p<0.05)；SF大劑量組與缺血再灌注組相比存在更顯著性差異(p<0.01)。SOD活性結(jié)果正好相反，

8、假手術(shù)組SOD活性最高為191.125±11.245U/mgprot，MI/R組SOD活性最低為136.956±7.644U/mgprot；而SF組則分別恢復(fù)到141087±6537U/mgprot(20mg/kg組)和152301±7261U/mgprot(40mg/kg組)。假手術(shù)組與MI/R組、SF小劑量組相比SOD活性存在顯著性差異(p<0.05)；假手術(shù)組與SF大劑量組相比SOD活性無顯著性差異；SF小劑量組與MI/R組比較S

9、OD活性有上升趨勢但無統(tǒng)計學(xué)差異；SF大劑量與MI/R組相比有顯著性差異(p<0.05)；SF大劑量組與SF小劑量組比較SOD活性有上升趨勢相比較有顯著性差異(P<0.01)。cNOS、iNOS活性比較結(jié)果顯示，假手術(shù)組cNOS活性最高為0.714±0.030 KU/gprot，MI/R組cNOS活性最低為0.584±0.125KU/gprot，而SF組則分別恢復(fù)到0.649±0.109KU/gprot(20mg/kg組)和0.655±

10、0.109 KU/gprot(40mg/kg組)，假手術(shù)組與MI/R組比較cNOS活性存在顯著性差異(p<0.01)，SF小劑量組cNOS活性高于MI/R組相比較有顯著性差異(p<0.05)；SF大劑量組cNOS活性高于MI/R組相比較有顯著性差異(p<0.05)；SF預(yù)處理組cNOS活性略低于假手術(shù)組，但無顯著性差異；假手術(shù)組iNOS活性最低為0.176±0.030 KU/gprot，而MI/R組iNOS活性明顯升高為0317±011

11、5KU/gprot，兩組相比存在顯著性差異(p<0.01)；經(jīng)SF干預(yù)后，iNOS活性分別下降為0.224±0.116 KU/gprot(20mg/kg組)和0.222±0.123 KU/gprot(40mg/kg組)。其中SF小劑量組與MI/R組iNOS活性相比存在顯著性差異(p<0.01)，SF大劑量組與缺血再灌注組iNOS活性相比存在顯著性差異(p<0.01)。SF預(yù)處理組iNOS活性略高于假手術(shù)組，但無顯著性差異。各項指標(biāo)SF大