人nanog-delta48基因的克隆及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、目的：構(gòu)建pcDNA5/FRT-nanog-delta48真核表達(dá)載體，檢測其在肝癌SMMC-7721細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 方法：通過RT-PCR的方法克隆nanog基因的剪切變異體nanog-delta48全長編碼序列，連接入pMD18-T載體，經(jīng)鑒定正確后亞克隆入空載質(zhì)粒pcDNA5/FRT，構(gòu)建pcDNA5/FRT-nanog-delta48真核表達(dá)載體，測序無誤后經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染到肝癌SMMC-7721細(xì)胞中，通過RT-

2、PCR初步鑒定其在SMMC-7721細(xì)胞中的表達(dá)，并通過四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測轉(zhuǎn)染前后的細(xì)胞增殖活力。
　　 結(jié)果：成功克隆nanog-delta48基因全長編碼序列，經(jīng)測序證明重組真核表達(dá)載體pcDNA5/FRT-nanog-delta48構(gòu)建成功，并使其在肝癌SMMC-7721細(xì)胞中過表達(dá)，MTT檢測nanog-delta48轉(zhuǎn)染入SMMC-7721細(xì)胞后，增殖能力增強(qiáng)。
　　 結(jié)論：剪接變異體nanog-d