ASC基因啟動子甲基化與卵巢癌發(fā)生的關(guān)系.pdf

1、目的探討ASC(Apoptosis-associatedSpeck-likeproteincontainingaCARD)基因在卵巢癌細胞株及組織中的甲基化狀態(tài)及該基因表達在卵巢癌發(fā)病機制中的作用。 方法選取人卵巢癌細胞株A2780，SKOV3，Anglne，CAOV3，OVCAR3，SW626，COC1，以及18例卵巢癌組織和10例正常卵巢組織作為研究對象，采用甲基化特異性PCR(MethylationspecificPCR，

2、MSP)檢測卵巢癌細胞株以及卵巢癌組織中ASC基因啟動子區(qū)域甲基化的狀態(tài)，用RT-PCR和WesternBlot方法分別檢測其mRNA和蛋白的表達。 結(jié)果 1.4/7株卵巢癌細胞(A2780，SKOV3，Anglne，SW626)中檢測出ASC基因的異常甲基化。發(fā)生甲基化的細胞株與未發(fā)生甲基化的細胞株ASC基因的mRNA和蛋白表達相比較下降明顯。 2.7/18例卵巢癌組織中檢測出ASC基因的異常甲基化，而10例正

3、常卵巢組織中均未發(fā)現(xiàn)ASC甲基化，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 結(jié)論卵巢癌中存在ASC基因甲基化，這可能是導(dǎo)致該基因沉默的重要原因，并在卵巢癌的發(fā)病機制中起作用。 5-氮-2’-脫氧胞苷對SKOV3卵巢癌細胞株ASC基因去甲基化的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用目的探討DNA5’CpG島去甲基化對SKOV3卵巢癌細胞株ASC基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用及對細胞株生長增殖的生物學影響。 方法用特異性DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮-2'-脫

4、氧胞苷(5-Aza-CdR)作用卵巢癌細胞株SKOV372h后，甲基化特異性PCR(MSP)檢測ASC基因啟動子區(qū)域甲基化的狀態(tài)，四唑鹽(MTT)比色、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、蛋白印跡(Westernblot)檢測用藥前后SKOV3細胞株生長倍增時間以及對ASCmRNA及蛋白表達的影響。 結(jié)果 (1)未經(jīng)5-氮-2’-脫氧胞苷處理的SKOV3細胞株呈甲基化陽性，而經(jīng)5-氮-2'-脫氧胞苷處理的SKOV3細胞株

5、呈非甲基化陽性。 (2)與對照組相比，3組不同5-氮-2’-脫氧胞苷濃度均能明顯抑制腫瘤細胞生長，倍增時間分別增加了1.14、1.31和1.43倍。 (3)經(jīng)5-氮-2’-脫氧胞苷處理后，ASC基因mRNA和蛋白表達明顯增加。 結(jié)論特異性甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮-2’-脫氧胞苷能較好地逆轉(zhuǎn)SKOV3細胞DNA異常甲基化，并有效地激活因高甲基化所致ASC基因沉默的再轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)該基因的表達，并抑制SKOV3細胞生長。