DACH1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及其與ER、PR表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：檢測(cè)細(xì)胞命運(yùn)決定因子Cell fate determination factor Dachshund(DACH1)蛋白在子宮內(nèi)膜癌、正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜、復(fù)雜增生子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá),并分析其與子宮內(nèi)膜癌臨床、病理特征及患者預(yù)后之間的關(guān)系,同時(shí)對(duì)其與ER、PR之間的相關(guān)性進(jìn)行研究,以探討DACH1、ER和PR在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用及相互關(guān)系,從而為子宮內(nèi)膜癌的診斷、治療及預(yù)后判斷提供新的依據(jù)。
　　 方法

2、
　　 1.選取山東大學(xué)齊魯醫(yī)院2002年5月年1月～2007年12月間收治的經(jīng)病理檢查證實(shí)的子宮內(nèi)膜癌患者80例,患者年齡在25～74歲之間,平均年齡為54.3歲。按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO,1988)提出的內(nèi)膜樣癌組織3級(jí)分類法,該80例子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本中病理學(xué)分級(jí)為G1級(jí)的有26例,占32.5％,病理學(xué)分級(jí)為G2級(jí)的有29例,占36.25％,病理學(xué)分級(jí)為G3級(jí)有25例,占31.25％。根據(jù)FIGO,2000年手術(shù)病理分

3、期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ期患者共44例,占55％,Ⅱ期患者共3例,占3.75％,Ⅲ期患者共32例,占40％,Ⅳ期患者1例,占1.25％。按病理類型分類,子宮內(nèi)膜樣腺癌共56例,占70％,腺鱗癌共8例,占10％,漿液性乳頭狀腺癌共6例,占7.5％,透明細(xì)胞癌共7例,占8.75％,鱗癌1例,占1.25％,未分化癌2例占2.5％。80例標(biāo)本中子宮肌層浸潤(rùn)≤1/2的患者共21例,占26.25％,子宮肌層浸潤(rùn)＜1/2的患者共18例,占22.5％。無(wú)肌層浸潤(rùn)的患

4、者共41例,占51.25％。出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的共14例,占17.5％,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的共66例,占82.5％。另外,80例子宮內(nèi)膜癌患者中有22例行血CA125檢測(cè),其中10例患者血CA125值增高,12例正常。選取同期因其他疾病而行手術(shù)切除的正常子宮內(nèi)膜患者20例(增殖期內(nèi)膜10例,分泌期內(nèi)膜10例)、子宮內(nèi)膜不典型增生患者10例、子宮內(nèi)膜復(fù)雜增生患者10例作為對(duì)照。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)80例子宮內(nèi)膜癌、20例正常子宮內(nèi)膜、10例不

5、典型增生子宮內(nèi)膜及10例復(fù)雜增生內(nèi)膜組織中DACH1蛋白的表達(dá),比較DACH1蛋白在各種組織中的表達(dá)的差異,分析DACH1蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌手術(shù)病理分期、組織病理學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理學(xué)類型、年齡、血CA125值等臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系及其對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者生存率的影響;同時(shí)檢測(cè)80例子宮內(nèi)膜癌組織中ER、PR的表達(dá),并分析DACH1、ER和PR之間表達(dá)的相關(guān)性,初步探討DACH1蛋白、ER和PR與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)

6、系。DACH1蛋白在不同組織中陽(yáng)性率的比較,及其表達(dá)與各臨床病理指標(biāo)之間關(guān)系的比較采用x2檢驗(yàn),DACH1蛋白、ER、PR在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)之間的相關(guān)性分析采用Spearman秩檢驗(yàn)相關(guān)分析。應(yīng)用Breslow(Generalized Wilcoxon)法計(jì)算并比較DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性組的子宮內(nèi)膜癌患者和DACH1蛋白表達(dá)陰性組的子宮內(nèi)膜癌患者的總體生存率并繪制生長(zhǎng)曲線。
　　 2.選擇我院2008年間手術(shù)切除后病理證實(shí)為

7、子宮內(nèi)膜癌的新鮮子宮內(nèi)膜標(biāo)本20例,另取門診刮宮后病理證實(shí)的正常內(nèi)膜組織10例,不典型增生內(nèi)膜組織5例,作為對(duì)照,所有標(biāo)本取材后立即放入液氮中,對(duì)以上新鮮標(biāo)本用免疫印跡(Western blot)方法檢測(cè)DACH1蛋白在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜不典型增生組織中的表達(dá),作為對(duì)免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果的驗(yàn)證。同時(shí)以已知的DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性的Hela細(xì)胞作為該實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照。DACH1蛋白在不同組織中陽(yáng)性率的比較采用x2檢驗(yàn)。

8、>　　 結(jié)果
　　 1.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性染色主要定位于腺體細(xì)胞胞核中,免疫組織化學(xué)結(jié)果示DACH1蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織、正常子宮內(nèi)膜組織、不典型增生和復(fù)雜增生子宮內(nèi)膜組織中表達(dá)的陽(yáng)性率分別為36.3％(29/80)、95％(19/20)、8/10、10/10,DACH1蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)顯著低于非癌的幾組(P=0.000)。手術(shù)病理分期為Ⅰ期的內(nèi)膜癌組織中DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為47.7

9、％,手術(shù)病理分期為Ⅱ-Ⅳ期的子宮內(nèi)膜癌組織中DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為22.2％,兩者比較,差異有顯著性(P＜0.05)。病理分級(jí)為G1-G2級(jí)的內(nèi)膜癌組織中DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為43.6％,病理分級(jí)為G3級(jí)的內(nèi)膜癌組織中DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為20％,兩者比較,差異有顯著性(P＜0.05)。內(nèi)膜樣癌組織中DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為42.2％,特殊類型子宮內(nèi)膜癌中DACH1蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率為2/16,兩者比較,差異有顯著性(P＜0

10、.05)。DACH1蛋白表達(dá)缺失與子宮內(nèi)膜癌的手術(shù)病理分期、病理分級(jí)和組織學(xué)類型呈顯著正相關(guān)。DACH1蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)程度及患者年齡無(wú)關(guān)(P＜0.05)。
　　 2.單因素生存分析顯示DACH1蛋白陽(yáng)性組子宮內(nèi)膜癌患者的總體生存率明顯高于DACH1蛋白陰性組子宮內(nèi)膜癌患者的總體生存率,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.032)。
　　 3.80例子宮內(nèi)膜癌組織中有34例呈ER陽(yáng)性表達(dá),表達(dá)陽(yáng)性率為42.5％,42

11、例呈PR陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率為52.5％,ER陽(yáng)性組DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為47.06％(16/34),ER陰性組DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為26.09％(12/46),PR陽(yáng)性組DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為52.4％(22/42),PR陰性組DACH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為18.4％(7/38),Spearman秩檢驗(yàn)相關(guān)分析顯示,子宮內(nèi)膜癌組織中DACH1蛋白表達(dá)與ER蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(ρ=0.245906,P=0.0279),DACH1蛋白表

12、達(dá)與PR蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(ρ=0.3527758,P=0.001330)。
　　 4.Western blot結(jié)果顯示,進(jìn)一步驗(yàn)證了DACH1蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)顯著低于正常子宮內(nèi)膜組織、不典型增生等非癌的兩組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。
　　 結(jié)論
　　 1.DACH1蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)明顯低于DACH1蛋白在正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜和復(fù)雜增生子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá),并與手術(shù)病

13、理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理類型有關(guān),DACH1蛋白陽(yáng)性組子宮內(nèi)膜癌患者的總體生存率明顯高于DACH1陰性組子宮內(nèi)膜癌患者的總體生存率,提示DACH1基因可能是子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的重要相關(guān)抑癌基因,其表達(dá)缺失可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、演進(jìn)中發(fā)揮重要作用,有望成為判斷子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的重要分子生物學(xué)標(biāo)志。
　　 2.DACH1蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)降低,ER、PR在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)也降低,且DACH1和ER、PR的表