甘蔗葉多糖提取純化及抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：本文以甘蔗葉為研究對(duì)象，對(duì)其所含水溶性多糖進(jìn)行提取工藝、純化工藝、純度驗(yàn)證及體外抗腫瘤活性研究，為深入研究甘蔗葉多糖及進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：采用L9(3)4多指標(biāo)正交實(shí)驗(yàn)考察甘蔗葉多糖最佳提取工藝。通過水提醇沉得到粗多糖，采用膜分離、脫蛋白、硅膠柱色譜、DEAE脫色、葡聚糖凝膠柱色譜等現(xiàn)代分離方法和技術(shù)對(duì)粗多糖進(jìn)行分離純化研究，利用葡聚糖凝膠柱色譜、理化檢驗(yàn)、紫外可見光譜、紅外光譜進(jìn)行多糖純度驗(yàn)證，精制多糖

2、完全水解后進(jìn)行高效液相分析，解析其單糖組成；采用苯酚-硫酸法動(dòng)態(tài)累積測(cè)定廣西甘蔗研究所采集的2009年30個(gè)品種和2010年20個(gè)品種甘蔗葉中粗多糖的含量。以半數(shù)抑制濃度(IC50)為考察指標(biāo)，篩選純化多糖對(duì)6種癌細(xì)胞的體外抗腫瘤活性。
　　結(jié)果：甘蔗葉粗多糖提取的最佳條件為料液比1:30，于100℃提取3次，每次5h，以純凈水為提取溶劑，水浴恒溫提取得率最高。提取后的粗多糖采用Sevage試劑脫蛋白、硅膠柱脫色素效果最優(yōu)，葡聚糖

3、凝膠柱處理后首次分離純化得到純度達(dá)到84.93％的水溶性甘蔗葉多糖，對(duì)其進(jìn)行水解后，高效液相分析表明其主要由果糖和葡萄糖構(gòu)成。紅外分析表明甘蔗葉水溶性多糖在4000~500cm-1范圍內(nèi)具有呋喃糖類物質(zhì)的特征吸收峰。2009年5個(gè)月份動(dòng)態(tài)累積結(jié)果顯示：桂糖02-237(66.54 mg·g-1)，桂引Q-190(63.41 mg·g-1)，桂Q-170(58.25mg·g-1)三個(gè)品種的多糖平均含量和總量均為（8~12月）最高。2010

4、年6個(gè)月份動(dòng)態(tài)累積結(jié)果顯示：桂糖02-237(31.42mg· g-1)，桂糖02-770(30.49mg· g-1)和桂糖97-69(28.12mg·g-1)三個(gè)品種的多糖平均含量和總量均為（7~12月）最高。在15.625~250μg·mL-1范圍內(nèi)甘蔗葉多糖對(duì) Bel7404，SK-OV-3，NCI-H460，CNE腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出較弱的抑制作用，IC50分別為3.45μg·ml-1，17.01μg·ml-1，52.6μg·ml-1

5、和41.65mg·ml-1；對(duì) Hela和Caco-2腫瘤細(xì)胞未表現(xiàn)出抑制作用。
　　結(jié)論：本文確定的甘蔗葉多糖提取工藝穩(wěn)定，合理。分離純化得到的多糖純度較高，紅外分析表明其甘蔗葉水溶性多糖為呋喃糖。其對(duì)Bel7404，SK-OV-3，NCI-H460，CNE4種腫瘤細(xì)胞的增殖抑制率隨著多糖溶液濃度的增高而有所提高，存在一定的劑量依賴性。由此可以確定甘蔗葉多糖對(duì)以上4種腫瘤細(xì)胞在較高濃度時(shí)具有一定的抗腫瘤活性。且多糖液具有無任何毒