人BCMA基因的克隆、表達及抗體制備.pdf

1、BCMA(B cell maturation antigen)是由185個氨基酸殘基組成的Ⅲ型跨膜蛋白。它屬于TNF受體家族成員,與其配體B細胞激活因子BAFF(B cell activating factorbelonging to the TNF family)或增殖誘導(dǎo)配體APRIL(a proliferation-inducing ligand)結(jié)合可刺激B細胞增生。BCMA在B細胞的增殖、發(fā)育以及在一些B細胞系腫瘤和自身免疫性

2、疾病中的作用有待進一步研究。
　　 本項目擬制備BCMA抗體,檢測BCMA在自身免疫性疾病患者B細胞表面和血清中的表達是否異常,探討B(tài)CMA與自身免疫性疾病的相關(guān)性。
　　 通過RT-PCR方法從Raji細胞的總RNA中擴增BCMA的全長cDNA,克隆入原核表達載體pET-28a(+)、pGEX-4T-1。pET-28a(+)-BCMA在大腸桿菌BL21(DE3)中表達,主要以包涵體形式存在于沉淀中。pGEX-4T-1-

3、BCMA在大腸桿菌DH5α中表達為可溶性蛋白,但是用該可溶性BCMA蛋白免疫小鼠6周后,采血進行流式細胞檢測發(fā)現(xiàn)免疫血清不能識別Raji細胞表面的BCMA蛋白。我們又從BCMA胞外區(qū)氨基酸序列中選取12個氨基酸,合成多肽BCMA-12aa,免疫新西蘭大白兔,得到了多克隆抗體,Western blot檢測發(fā)現(xiàn)所得多克隆抗體能夠識別多肽BCMA-12aa、可溶性和包涵體形式的BCMA,但是仍不能識別Raji細胞表面的BCMA蛋白。