兔眼視神經(jīng)結(jié)扎后玻璃體腔內(nèi)注射尿激酶的視網(wǎng)膜血管穿透能力的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的
　　 視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈阻塞(central retinal artery occlusion，CRAO)是一種嚴(yán)重的致盲性眼病，是急性視網(wǎng)膜缺血性病變，目前尚無(wú)理想的治療方法[1-3]。Schmidt等[5]1992首次應(yīng)用尿激酶選擇性眼動(dòng)脈溶栓技術(shù)治療CRAO獲得初步的效果，患者的視網(wǎng)膜水腫減輕、缺血改善、視力顯著提高。隨著方法不斷改進(jìn)，有研究顯示局部介入動(dòng)脈內(nèi)溶栓治療能明顯改善視力[6]，但臨床有發(fā)生偏癱等嚴(yán)重并發(fā)

2、癥的報(bào)道[8]。這些嚴(yán)重的系統(tǒng)并發(fā)癥是由于尿激酶的作用范圍太廣產(chǎn)生的，如果能使尿激酶的作用僅局限在眼內(nèi)，就能有效的避免中樞神經(jīng)系統(tǒng)的嚴(yán)重并發(fā)癥。
　　 尿激酶(Urokinase，UK)是目前臨床應(yīng)用最廣泛的溶栓藥[21]，用于前房沖洗、結(jié)膜下注射等局部治療未見(jiàn)發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥的報(bào)道。UK屬于非纖維蛋白特異性纖溶酶原激活劑，具有半衰期短但降解纖維蛋白原和凝血因子的作用卻能持續(xù)達(dá)12～24小時(shí)之久的特點(diǎn)，而且對(duì)人體無(wú)抗原性，不會(huì)引起

3、過(guò)敏反應(yīng)。
　　 Kamei等[26]曾報(bào)道玻璃體腔內(nèi)注射纖溶酶原激活劑能穿透家兔視網(wǎng)膜，并溶解視網(wǎng)膜下血凝塊，未見(jiàn)明顯副作用。但是玻璃體腔注射纖溶酶原激活劑能否治療視網(wǎng)膜血管阻塞性疾病，目前尚不清楚。
　　 我們假設(shè)存在玻璃體腔注射UK的技術(shù)治療視網(wǎng)膜血管阻塞性疾病的可能性，首先要觀察UK能否進(jìn)入視網(wǎng)膜血管內(nèi)。本研究通過(guò)對(duì)兔眼進(jìn)行視神經(jīng)結(jié)扎后玻璃體腔內(nèi)注射尿激酶，觀察尿激酶的對(duì)視網(wǎng)膜血管的穿透能力，從而為玻璃體腔注射U

4、K治療視網(wǎng)膜血管阻塞性疾病奠定基礎(chǔ)。
　　 材料與方法
　　 方法：選用健康成年家兔54只，隨機(jī)分為A、B、c、三組，每組18只，A、B組為實(shí)驗(yàn)組，C組為對(duì)照組，均以右眼為實(shí)驗(yàn)眼。
　　 A組對(duì)家兔視神經(jīng)進(jìn)行結(jié)扎，然后玻璃體腔內(nèi)注射濃度容量為5000UI/0.1ml的尿激酶(Urokinase，UK)，B組不做視神經(jīng)處的結(jié)扎處理，直接在玻璃體腔內(nèi)注射濃度容量為5000U/0.1ml的尿激酶(Urokinase，U

5、K)，C組直接在玻璃體腔內(nèi)注射0.1ml磷酸緩沖液(Phosphate Buffered Saline，PBS)。
　　 以玻璃體腔內(nèi)注射后24小時(shí)為觀察時(shí)間點(diǎn)，A、B組分別隨機(jī)選取10只家兔，C組隨機(jī)選取2只家兔摘除眼球，制作視網(wǎng)膜組織的石蠟切片，進(jìn)行視網(wǎng)膜組織常規(guī)病理檢查和免疫組織化學(xué)染色觀察尿激酶的滲透能力，使用NikonDS-Ril生物顯微鏡進(jìn)行圖像采集并用及Image-Pro Plus6.0醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)圖像分析軟件計(jì)算切片

6、中每個(gè)血管染色的平均光密度(Mean Optical Density，MOD)值。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用兩獨(dú)立樣本的檢驗(yàn)(t檢驗(yàn))比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1.滲透進(jìn)入視網(wǎng)膜血管中UK的定性與定位表達(dá)：C組及實(shí)驗(yàn)組陰性對(duì)照切片的血管腔中均未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)的棕黃色顆粒，A、B組的免疫組織化學(xué)染色的切片中可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)的棕黃色顆粒，A組陽(yáng)性表達(dá)定位主要在視網(wǎng)

7、膜血管壁、血管腔內(nèi)和視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層、外叢狀層及外核層。B組均可見(jiàn)沿內(nèi)界膜表面呈棕黃色的帶狀分布，在視網(wǎng)膜血管壁及其他層次內(nèi)也可以見(jiàn)棕黃色顆粒。
　　 2.UK的視網(wǎng)膜血管穿透能力分析：A組免疫組織化學(xué)染色切片中可見(jiàn)視網(wǎng)膜血管腔和其他各層內(nèi)有棕黃色顆粒，B組免疫組織化學(xué)染色切片均可見(jiàn)沿內(nèi)界膜表面呈棕黃色的帶狀分布，在視網(wǎng)膜血管壁及其他層次內(nèi)也可以見(jiàn)棕黃色顆粒，但是視網(wǎng)膜血管腔內(nèi)未見(jiàn)棕黃色顆粒。

8、r>　　 玻璃體腔內(nèi)注射相同藥物濃度和作用時(shí)間A組與B組間視網(wǎng)膜血管穿透能力的比較：視神經(jīng)結(jié)扎和無(wú)視神經(jīng)結(jié)扎因素，兩組間UK的視網(wǎng)膜血管穿透能力的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=14.603，p<0.05)。
　　 3.尿激酶的視網(wǎng)膜毒性作用：C組家兔視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)完整，各層次結(jié)構(gòu)完整，排列整齊規(guī)則。B組視網(wǎng)膜表面光滑，視網(wǎng)膜各層分界清晰，外核層細(xì)胞數(shù)量有減少，內(nèi)外核層細(xì)胞核間隙稍稀疏，其余層次未見(jiàn)明顯變化?？梢?jiàn)5000U/0.1ml的尿