嗜鉻細(xì)胞瘤全基因組拷貝數(shù)變化分析和相關(guān)基因的研究.pdf

1、研究目的：
　　 1.對(duì)散發(fā)型嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞的全基因組DNA拷貝數(shù)異常（Copy number variationsCNVs）和雜合性缺失（Loss of heterozygosity LOH）的系統(tǒng)分析，發(fā)現(xiàn)與腫瘤相關(guān)的拷貝數(shù)變化和雜合性缺失的所在染色體區(qū)位，篩選所涉及嗜鉻細(xì)胞瘤腫瘤相關(guān)基因或者分子標(biāo)志物，為嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷與治療提供新的參考資料。
　　 2.分析所篩選基因m-RNA的表達(dá)水平在良性與惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中的

2、分布差異，尋找鑒別良惡性嗜鉻細(xì)胞瘤的分子遺傳學(xué)標(biāo)記物，并證明應(yīng)用SNP芯片是篩選腫瘤相關(guān)基因有效性方法。
　　 材料與方法：
　　 1.應(yīng)用Affymetrix公司GeneChip SNP6.0芯片檢測(cè)5例嗜鉻細(xì)胞瘤（包括腫瘤組織和自身白細(xì)胞）全基因組的DNA拷貝數(shù)異常（包括擴(kuò)增和缺失）和LoH。
　　 2.分析SNP6.0芯片檢測(cè)結(jié)果；篩選DNA發(fā)生缺失、擴(kuò)增區(qū)域或LoH區(qū)域內(nèi)含基因?yàn)槭茹t細(xì)胞瘤腫瘤相關(guān)基因。<

3、br>　　 3.入選北京協(xié)和醫(yī)院2000年至2008年明確診斷的嗜鉻細(xì)胞瘤29例，其中良性組19例，惡性組10例。另取12例正常腎上腺髓質(zhì)組織為正常對(duì)照組。提取各組細(xì)胞DNA。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR（real-time PCR）方法檢測(cè)各組候選基因的m-RNA表達(dá)情況。
　　 4.統(tǒng)計(jì)分析候選基因m-RNA的表達(dá)水平在不同病理類型（良/惡性）嗜鉻瘤中的的分布差異，分析候選基因與嗜鉻細(xì)胞瘤臨床病理類型及預(yù)后之間的關(guān)系。
　　

4、 結(jié)果：
　　 1.5例嗜鉻細(xì)胞瘤組織與配對(duì)的正常細(xì)胞相比，5例均發(fā)生缺失的染色體是1p21.1-1p21.2；4例或4例以上嗜鉻細(xì)胞瘤發(fā)生缺失的染色體主要是1p、3q和11p。
　　 2.5例嗜鉻細(xì)胞瘤組織細(xì)胞與配對(duì)的正常細(xì)胞相比，4例或4例以上嗜鉻細(xì)胞瘤發(fā)生擴(kuò)增的染色體主要是5q。
　　 3.5例嗜鉻細(xì)胞瘤組織與配對(duì)的正常細(xì)胞相比，5例嗜鉻細(xì)胞瘤，都發(fā)生LOH。其中4例發(fā)生染色體1p、11p、11q的LOH；

5、共同區(qū)域和基因?yàn)椋?1p15.13和SOX6；3例發(fā)生染色體5q的L，OH，共同區(qū)域和基因?yàn)椋?q31.3和NRG2；2例發(fā)生染色體3p、6q的LOH。
　　 4.在3例共同發(fā)生缺失的染色體5q31.3含基因NRG2以及其同源基因NRG1為候選基因。
　　 5.NRG2-mRNA在良性嗜鉻細(xì)胞瘤、惡性嗜鉻細(xì)胞瘤和正常腎上腺髓質(zhì)組織內(nèi)均有表達(dá)，在嗜鉻細(xì)胞瘤中表達(dá)顯著低于正常腎上腺髓質(zhì)（P<0.01）：而在良惡性嗜鉻細(xì)胞瘤組

6、之間無顯著性差異（P>0.05）。NRG1-mRNA在惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中表達(dá)顯著高于良性嗜鉻細(xì)胞瘤（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.SNP6.0芯片能夠有效發(fā)現(xiàn)和精確定位嗜鉻細(xì)胞流全基因組DNA拷貝數(shù)的微小變化和LoH區(qū)域，可以發(fā)現(xiàn)新的染色體CNV區(qū)域。
　　 2.DNA發(fā)生擴(kuò)增或缺失可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，可能是腫瘤的發(fā)病基礎(chǔ)。檢測(cè)結(jié)果為進(jìn)一步定位篩選和克隆與嗜鉻細(xì)胞瘤相關(guān)基因提供了重要的線索和理論信