膽木注射液化學(xué)成分及其抗炎物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、膽木(Nauclea officinalis Pierre ex Pitard)為茜草科烏檀屬植物，分布于我國的海南、廣西和廣東一帶，其莖、皮均可入藥，性味苦寒，具有清熱解毒、消腫止痛之功效。膽木的主要產(chǎn)品“膽木注射液”上市已有三十余年，臨床用于急性扁桃腺炎，急性咽喉炎、急性結(jié)膜炎及上呼吸道感染的治療。膽木注射液臨床療效確切，然而其化學(xué)成分和抗炎物質(zhì)基礎(chǔ)并不清楚。本文以膽木注射液為對象，采用傳統(tǒng)的柱分離技術(shù)與現(xiàn)代儀器聯(lián)用技術(shù)如GC/MS

2、、HPLC-UV/ESI/MSn，對膽木注射液的化學(xué)成分進(jìn)行了較為系統(tǒng)、全面和深入地研究。并結(jié)合體內(nèi)、體外藥效活性實(shí)驗(yàn)，研究了膽木注射液中的部分單體化合物及大孔吸附樹脂不同溶劑洗脫部位的抗炎活性。取得了以下成果和結(jié)論：
　　1、從膽木注射液中分離和鑒定了9個單體，包括2個酚苷(1，2)，5個吲哚類生物堿苷(3，4，7～9)和2個喹啉酮類生物堿苷(5，6)。其中1個單體(4)為新化合物，1個單體(1)為首次從該屬植物中分離得到，2個

3、單體(2，7)為首次從該植物中分離得到。它們分別是3，4-dimethoxyphenol-β-D-apiofuranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside(1)，kelampayosideA(2)，naucleamide A-10-O-β-D-glucopyranoside(3)，naucleamide F-10-O-β-D-glucopyranoside(4)，pumiloside(5)，3-epipumilosi

4、de(6)，3α，5α-tetrahydrodeoxycordifoline lactam(7)，strictosamide(8)，vincosamide(9)。
　　2、在上述工作基礎(chǔ)上，我們通過離子阱質(zhì)譜技術(shù)分析了膽木注射液中15個單體化合物的質(zhì)譜裂解行為，得到其質(zhì)譜裂解規(guī)律，進(jìn)而應(yīng)用HPLC-UV-ESI/IT/MSn技術(shù)推測了膽木注射液中的10個化合物，總共鑒定了膽木注射液中的25個化學(xué)成分，這些化學(xué)成分可為有機(jī)酚酸及其苷

5、、環(huán)烯醚萜苷和生物堿苷三類。
　　此外，我們還首次應(yīng)用GC/MS技術(shù)對膽木注射液中易揮發(fā)、低沸點(diǎn)的成分進(jìn)行了研究，分離并鑒定了20個化合物。
　　3、建立同時測定膽木注射液中12個活性成分含量的方法。采用HPLC-DAD法，色譜柱Welch Material XB-C18(4.6mm×250 mm，5um)，流動相為乙腈(A)-0.1％甲酸水(B)，梯度洗脫，流速1 mL·min-1，DAD掃描波長190～400nm，基本實(shí)

6、現(xiàn)了12個成分和其它化合物的基線分離。12個成分的線性回歸系數(shù)均大于0.9999，重復(fù)性、回收率及準(zhǔn)確度均良好?？勺鳛槟懩咀⑸湟旱馁|(zhì)量控制方法。
　　4、在基本闡明膽木注射液化學(xué)成分的基礎(chǔ)上，以膽木注射液不同溶劑洗脫部位(D101大孔樹脂水洗脫部位、10％EtOH洗脫部位和95％EtOH洗脫部位)及9個單體對LPS誘導(dǎo)RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞模型產(chǎn)生NO的抑制作用，評價(jià)了其抗炎活性。結(jié)果表明：95％EtOH洗脫部位對NO有明顯

7、的抑制作用，9個單體對NO也有一定的抑制作用。進(jìn)一步以三個體內(nèi)模型評價(jià)了膽木注射液95％EtOH洗脫部位的抗炎藥效活性，結(jié)果表明，95％EtOH洗脫部位對雞蛋清致小鼠耳廓腫脹、大鼠足跖腫脹及醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加均具有明顯的抑制作用，且效果好于同等劑量下的陽性對照藥阿司匹林。
　　綜上所述，本文研究清楚了膽木注射液液的基本化學(xué)成分組成，其主要化學(xué)成分組成為有機(jī)酚酸及其苷、環(huán)烯醚萜苷和生物堿苷三類。首次發(fā)現(xiàn)膽木及其注射液中含有

8、新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、3，4-dimethoxyphenol-β-D-apiofuranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside，kelampayoside A等6個酚酸及其苷；馬錢酸和7-脫氫馬錢酸乙酯2個環(huán)烯醚萜苷；naucleamide F-10-O-β-D-glucopyranoside和3α，5α-tetrahydrodeoxycordifoline lactam2個生物堿苷?；娟U明了膽木注射液抗炎物