IBV小囊膜蛋白的原核表達(dá)及序列分析.pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文IBV小囊膜蛋白的原核表達(dá)及序列分析姓名：張芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：魏萍20060620E x p r e s s i o no f E G e n e o f I B V a n d A n a l y s i s o n t h e EG e n e s o f D i f f e r e n t I B V a n d D i f f e r e n tC o r o n a v i

2、m s sA b s t r a c tA v a i n I n f e c t i o u sb r o n e h i 血( m ) i sc a u s e d b yt h e i n f e c t i o u sb r o n e h i t l sv i r u s ( ⅢV ) w h i c hb e l o n g s t o t h e C o l ' o n a v l r l E ．I t i sa

3、l l e v e l o p e d p o s l t i v e - s l r a n d R N A v i r u s e ．a(chǎn) l s o t h e b i g g e s t o I 】e i n t h eC o r o n a v i n m ．田l i sv i r u s h a s f o l “ p r o t e i n s ，w h i c h 勰s i p k ep r o t e i n ( s )

4、 ’m a l n xp r o t e m o v D ，n e c l e o c a p s i d p r o t e i n ( N ) a n d t h ee n v e l o p ep r o t e i n 餌) ．W e u s e dd om u c h m o l e s t a y O n t h e p r o t e i n so f S ，M a n d N t h a n 0 1 1 t h e p

5、m t e i n E ．T h e t h i r dO R F o fI B V e n c o d e st h ee n v e l o p ep r o t e i n ．I t sm o l e c u l a r w e i g h ti s 1 2 ．4 K D ．I t Ⅲc o m p a n y w a t ht h eM p m t e i nt of o r m a t eV ' m a s - l i

6、 k ep a r t i c l eW L P ) ．w h c h p l a y s 鋤i m p o r t a n t r o l ei nt h eI m l e o s a i m m u r a t y ．I nt h e p r o c e s so f r e p r o d u c e ，Ep r o t e i nt a k e s p a r ti nt h ef o r m a t m n o f V L P

7、 a n db u d d i n go f t h e w h o l ev i r u s ．R e c e n t l y , w ef o u n d t h e r ei sa l o to f E p r o t e i ni nt h eh t ep e r i o do f t h eI B V i n f e c t i o n , a n d p r e s u m e d t h e E p r o t e i n

8、 i s r e h t e d t o t h e a p o p t o s l s ．I nt h i s s t u d yt h ee n v e l o p ep r o t e i n ⑩g e n eo fA v i a n I n f e c t i o u sB r o n c h i U sV ' a - u s0 B Y ) M 4 1s t r a i n w a s c l o n e d , a n

9、 d s u b c l o n e d i n t o p r o k a r y o t i c e x p r e s s i n g v e c t o r p G E X - 6 P 一1 ．F u s i o n p r o t e i n w a si n d u c e d b yI F r G a f t e rb e i n gv e r i f i e d ．T h eG S T p r o t e i ne x

10、p r e s s e db y t h ep O E X - 6 P - I + B L 2 1w a sp u r i f i e d ，t h eG S T p r o t e i n W a s i r n m u n e d i n t om o u s a s a c c o r d i n g t o t h en O l T l l a li m m u n i t y p r o c e s s ，a n dt h e

11、m u l t i _ e l o n e ds e m mW a s o b t a i n e d ．T h em u l t i - c l o n e dS e r u n lw a s u s e dt o t e s t t h e f u s i o np r o t e i nG S T - E a n di t sa c t i v i t y , i na d d t u o nt O t h i s , t h e

12、G S T - E W a s u s e dt ot e s t t h ea n l a b o d yi nt h eb l o o do fS P F e i n c k e n sw h m h h a sb e e nm f e e t e db y t h eI B V a l lt h e s ew ∽d o n e t oe x p l o r e t h ee x p r e s s i o no ft h eE p

13、 r o t e i ni nt h eE s c h e r i c h i ac o l ia n d t h ee x p e c t a t i o no f t h eE p r o t e i nu s e di nt h ee x a m m a t i o n o ft h ev i r e s ．M e u n w h l l e ．t h eE p r o t e i ns e q u e n c e si nm a

14、 n y s t r a i n so fI B Va n dt h i so f o 出盯t y p e so fe o r o v a v i r u s w e r e c o m p a r e d , m o r d e r t o o f f e r s o m e i n f o r m a l a o n t o t h e f u t u r e s t u d y o f t h e E ．T h eM 4 1 E

15、p r o t e mg e n eW a s c l o n e di n t ot h ep G E X - 6 P 一1 ，a n dt h eG S T - Ef u s i o np r o t e mw a sg o t , w i n c hW a s a b o u t3 8 ．4 K D ．I n t h ew e s t e r n - b l o t t i n gt e s t , t h e r ew a s

16、al - 洲o n l a n ei n t h ea m o f3 8 ．4K D ，s h o w e d t h a tt h eG S T - E h a d l ' ＆l c f i o na c t i v i t y ．W a s t e m - b l o t t i n gW a s a l s ou s e d t oi d e n t i f i e dt h e b l o o d o f S P F c

17、 h i c k e n s w h i c h w e r e i n f e c t e d b y I B V , f o u n d t h e a n t i - E a n y b o d y C a l l b e f o u n d e v e rs i n g et h e5 “d a y u n t i l n l c 1 4 md a ya f t e ri n f e c t e d1 1 1 eI B V Es

18、 e q u e n c e sc o m p a r i s o ns h o w e d t h a ta l t h o u g ht h eb l o o dt y p e sw e ∞d i f f e r e n t , t h e s e q u e n c e s o f t b eE p r o t e mw e r e c o n s e r v a t i v e ．B u tt h eEg m e s o f I

19、 B V a n d T C o V h a d l o w h o m o l o g y w i t h o l l l e r t y p e s o f c o r o v a v t m s ’，w h i l e t h es e q u e n c e s o fd d §e r e n tt y p e so f e o m v a v i m s w ∞b e i n g a n a l y s c d ．1