馬鹿茸血酶解肽免疫活性及抗氧化活性的研究.pdf

1、鹿茸血是指加工排血茸時由鮮鹿茸中取出的血液成分。本論文對酶解馬鹿茸血制備免疫活性肽的條件進(jìn)行了優(yōu)化，并對水解物進(jìn)行了分離純化；通過體外、體內(nèi)試驗(yàn)研究了鹿茸血原血及由木瓜酶水解得到的兩種肽對小鼠免疫功能及抗氧化功能的影響。 選用木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶在最適條件下對馬鹿茸血水解，以水解度(DH)以及水解物對·OH和DPPH·的清除率為指標(biāo)，確定木瓜蛋白酶作為本次試驗(yàn)水解用酶。確定木瓜蛋白酶水解度最高的水解條件為溫度52℃

2、、pH為7.4、酶用量(E/S)為12690U/g底物、[S]為8％，在該條件下水解得到水解肽I水解度為18.1％；清除·OH最高的水解條件溫度52℃、pH為7.0、酶用量(E/S)為11269U/g底物、[S]為10％，該條件下得到的水解肽II水解度為12.2％，·OH清除率為51.3％；與原血相比，水解肽I和水解肽II表現(xiàn)出更高的抗氧化活性。采用HPLC測得馬鹿茸血水解物中以相對分子質(zhì)量小于1000的小肽居多。 對鹿茸血及其

3、水解肽I和水解肽II進(jìn)行體外活性檢測試驗(yàn)，結(jié)果表明水解肽II能顯著刺激脾淋巴細(xì)胞增殖，對·OH和DPPH·有較高的清除作用(P<0.05)。然后，以鹿茸血及其水解肽I和水解肽II為受試樣品，對小鼠進(jìn)行動物試驗(yàn)。動物試驗(yàn)表明鹿茸血水解肽Ⅱ組能極顯著提高小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫功能(P<0.01)，同時，能顯著增強(qiáng)小鼠的總抗氧化能力和SOD活性、降低丙二醛含量(P<0.05-0.01)，在防止脂質(zhì)過氧化減輕組織細(xì)胞的損傷等具有重要作用。馬鹿茸

4、血及其酶解肽抗氧化性與免疫性相關(guān)性分析結(jié)果顯示，具有較強(qiáng)抗氧化活性的肽同時顯示出很強(qiáng)的免疫活性，相關(guān)系數(shù)r=0.87，(P<0.05)。 采用732陽離子交換樹脂對馬鹿茸血水解肽II進(jìn)行初步分離，得到a、b、c、d四個組分。用大孔吸附樹脂對四個組分脫鹽處理后，通過抗氧化活性及免疫活性測定，組分a對·OH和DPPH·青除效果較好，并且刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖效果顯著(P<0.05)。對組分a采用SephadexG-15做進(jìn)一步分離純