上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)記物在干燥綜合征唇腺中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景和目的：
　　干燥綜合征(Sjogren’s syndrome,SS)是一種累及全身外分泌腺的自身免疫性疾病,臨床上以口干、眼干為特征,90％為女性,男女比例為1:9～1:20,發(fā)病年齡高峰為40～50歲,此病可以單獨(dú)存在,稱為原發(fā)性干燥綜合征(pSS),也可以與其他自身免疫疾病并存,稱為繼發(fā)性干燥綜合征(sSS)。其臨床表現(xiàn)復(fù)雜,發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚。其主要病理特征表現(xiàn)為大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),此外還存在腺體萎縮,間質(zhì)纖維化,腺體

2、功能喪失,出現(xiàn)干燥癥狀。國(guó)內(nèi)外報(bào)道發(fā)現(xiàn)組織器官慢性纖維化中,上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition,EMT)過(guò)程發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。
　　EMT是指在胚胎發(fā)育、腫瘤轉(zhuǎn)移或組織纖維化過(guò)程中發(fā)生的上皮細(xì)胞脫黏附而轉(zhuǎn)變成具有遷移能力的間質(zhì)細(xì)胞的現(xiàn)象,即上皮細(xì)胞丟失掉上皮特征同時(shí)獲得間質(zhì)特征的過(guò)程。此過(guò)程出現(xiàn)上皮細(xì)胞發(fā)生活化,E-cadherin、β-catenin細(xì)胞角蛋白(CK)等表達(dá)下調(diào)

3、,上皮細(xì)胞間的粘附性下降,極性喪失,活化的上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)殚g質(zhì)細(xì)胞,表達(dá)Fsp1、Vinmentin、α-SMA等。E-cadherin是細(xì)胞之間相互黏附的鈣依賴型跨膜蛋白,參與形成和維護(hù)正常細(xì)胞間的連接,Fsp1成纖維細(xì)胞特異性蛋白,作為上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中成纖維細(xì)胞標(biāo)記的特異性蛋白,TGF-β1(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子)在EMT轉(zhuǎn)化過(guò)程中起著重要的介導(dǎo)作用,Vinmentin是間質(zhì)細(xì)胞成分標(biāo)記。
　　慢性炎癥中實(shí)質(zhì)細(xì)胞的萎縮,上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

4、,膠原纖維增生是目前許多慢性纖維化疾病研究的熱點(diǎn)。SS唇腺組織中間質(zhì)纖維化,腺體萎縮是否存在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的病理機(jī)制還未所知,其Fsp1蛋白在唇腺中的表達(dá)情況如何未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Fsp1、E-cadherin、TGF-β1和Vinmentin的檢測(cè),了解唇腺病變中是否存在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化機(jī)制,以及結(jié)合Masson染色和阿利新蘭(AB)粘液染色分別觀察SS唇腺纖維化程度和腺體細(xì)胞的分泌功能狀況,試圖探討SS患者唇腺間質(zhì)纖維化、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化破

5、壞粘液分泌功能的可能機(jī)制,并為臨床病理診斷提供可靠的形態(tài)功能學(xué)依據(jù)。
　　材料和方法：
　　材料：
　　唇腺標(biāo)本取自2008年1月--2013年3月期間汕大醫(yī)學(xué)院病理科臨床活檢標(biāo)本50例,符合2002年修訂的干燥綜合征國(guó)際分類診斷標(biāo)準(zhǔn),并收集所有患者臨床資料包括自身抗體(抗SSA、抗SSB抗體、ANA、RF)、血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、球蛋白、γ-球蛋白),急性期反應(yīng)物(C反應(yīng)蛋白(CRP),紅細(xì)胞沉降率

6、(ESR))和補(bǔ)體(C3,C4)水平。10位非自身免疫性疾病患者的唇腺作為對(duì)照組。
　　方法：
　　1.HE染色切片觀察唇腺的病變特點(diǎn),確定SS唇腺病理分級(jí)。
　　2.膠原纖維染色用Masson染色觀察唇腺中膠原纖維的面積百分比。
　　3.阿利新蘭粘液染色用阿利新蘭染色劑染色唇腺腺泡中粘液,觀察唇腺粘液的面積百分比。
　　4.免疫組織化學(xué)染色用Envision兩步法觀察SS唇腺組織中E-cadherin、T

7、GF-β1、Fsp1、Vinmentin蛋白的表達(dá)情況。
　　5.圖像分析法應(yīng)用Leica IM50圖像采集系統(tǒng)和Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)對(duì)染色結(jié)果分析。
　　6.統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS13.0對(duì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行分析,采用t檢驗(yàn)、方差分析和Pearson相關(guān)分析。
　　結(jié)果：
　　1.HE、阿利新蘭染色和Masson染色觀察在50例SS病變中,輕度病變7例,中度23例,重度20例。10例正常唇腺

8、組織間質(zhì)膠原纖維和粘液物質(zhì)面積百分比分別為(5.0±1.6)%和(67.3±4.9)%,相比正常組織SS唇腺膠原纖維面積增加了約一倍(12.6±6.4)%,腺體粘液物質(zhì)減少為正常的一半左右(30.3±6.8)%,正常與SS病變唇腺比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。隨著病變程度加重,間質(zhì)膠原面積的百分比逐漸增高,而分泌的粘液逐漸減少。
　　2.上皮細(xì)胞標(biāo)記蛋白E-cadherin在10例正常唇腺組織的MOD值為0.136±0.

9、056,SS病變唇腺E-cadherin的表達(dá)水平下降,MOD值為0.069±0.05,兩者比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。隨著病變程度的增加,SS腺泡和導(dǎo)管上皮E-cadhrin表達(dá)逐漸減少,輕度、中度和重度病變唇腺E-cadhrin的MOD值分別為0.128±0.013、0.098±0.041、0.037±0.015。
　　3.上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要調(diào)節(jié)因子TGF-β1在SS唇腺組織中相比正常表達(dá)增加。10例正常唇腺組織

10、,TGF-β1的MOD值為0.032±0.013,50例SS唇腺組織TGF-β1的MOD值為0.067±0.04,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);重度病變唇腺組織TGF-β1表達(dá)較輕度增加明顯。
　　4.上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化特異性蛋白Fsp1從正常唇腺組織發(fā)展到SS的過(guò)程中表達(dá)增加。Fsp1在10例正常唇腺組織中僅少量間質(zhì)成纖維細(xì)胞表達(dá),其MOD值為0.027±0.006,50例SS唇腺組織中,其MOD值為0.104±0.0

11、68,兩者比較差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。隨著炎癥病變程度的增加,Fsp1的MOD值逐漸升高,輕度0.044±0.012,中度0.105±0.043,重度0.152±0.059。
　　5.間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記蛋白Vinmentin正常唇腺組織與SS病變比較,Vinmentin的表達(dá)增加,10例正常唇腺組織中,Vinmentin在間質(zhì)細(xì)胞和血管上皮中表達(dá),MOD值為0.009±0.003;SS唇腺組織中可見(jiàn)部分腺體導(dǎo)管上皮細(xì)胞

12、和間質(zhì)細(xì)胞Vinmentin呈陽(yáng)性表達(dá),MOD值為0.027±0.013,與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。隨著病變和纖維化程度增加Vinmentin表達(dá)增強(qiáng),其中輕度0.015±0.007,中度0.023±0.009,重度0.037±0.012。
　　6.臨床血清參數(shù)與纖維化及EMT指標(biāo)相關(guān)性分析SS患者IgG、球蛋白和γ球蛋白水平隨著唇腺病變程度增加而升高;血清IgG、球蛋白和γ球蛋白水平與病變唇腺纖維化程度之間分

13、別存在正相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)分別為r=0.37(p<0.05),r=0.41(p<0.01),r=0.56(p<0.001)。血清IgG與Fsp1、TGF-β1之間存在正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為r=0.32和r=0.26(p<0.05),與E-cadherin的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)(r=-0.398,p<0.05),與Vinmentin蛋白之間未見(jiàn)明顯的相關(guān)性。球蛋白和γ球蛋白水平與E-cadherin蛋白表達(dá)強(qiáng)度之間存在呈負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為r

14、=-0.43(P<0.05)和r=-0.40(p<0.05);γ球蛋白與Fsp1和Vinmentin表達(dá)強(qiáng)度存在正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為r=0.38(p<0.05)和r=0.452(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.SS隨病變輕、中、重的進(jìn)展,唇腺腺體小葉萎縮,腺泡破壞增加,粘液物質(zhì)分泌減少,間質(zhì)纖維化增加。
　　2.SS病變進(jìn)程中,上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-cadherin在腺泡和導(dǎo)管上皮細(xì)胞中的表達(dá)逐漸減少,而EMT重要