葛根提取物對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞體外增殖的影響及機(jī)理研究.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜癌又稱子宮體癌，是女性生殖道系統(tǒng)常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，高發(fā)年齡為58～61歲，約占女性癌癥總數(shù)的7％，已占到女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20％～30％。子宮內(nèi)膜癌是一種起源于子宮內(nèi)膜的雌激素依賴性惡性腫瘤。近年來(lái)，隨著激素替代治療(HRT)廣泛應(yīng)用，子宮內(nèi)膜癌在我國(guó)發(fā)病率逐年上升，與宮頸癌比較，已趨于接近甚至超過(guò)，受到研究者高度重視。雖然有多家研究機(jī)構(gòu)致力于子宮內(nèi)膜癌的研究工作，但對(duì)其發(fā)病機(jī)制仍不十分明確。更深入的研究工作仍需

2、要進(jìn)一步開(kāi)展。為此，本實(shí)驗(yàn)以子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa細(xì)胞為研究對(duì)象，研究子宮內(nèi)膜癌的主要發(fā)病機(jī)制，首次探討葛根提取物對(duì)Ishikawa細(xì)胞的影響，以及葛根提取物抑制Ishikawa細(xì)胞體外增殖作用機(jī)制，為中醫(yī)藥治療子宮內(nèi)膜癌提供理論基礎(chǔ)和體外實(shí)驗(yàn)的資料。 方法： 1、MTT法分別地檢測(cè)葛根提取物對(duì)Ishikawa細(xì)胞體外增殖的抑制作用：不同濃度葛根提取物處理Ishikawa細(xì)胞48小時(shí)后，測(cè)定光吸收值，計(jì)算抑制率

3、，獲得量效數(shù)據(jù)。取IC50濃度葛根提取物處理Ishikawa細(xì)胞24、48、72、96、120小時(shí)后，測(cè)定光吸收值，計(jì)算抑制率，獲得時(shí)效數(shù)據(jù)。 2、流式細(xì)胞術(shù)分別測(cè)定葛根提取物對(duì)Ishikawa細(xì)胞周期及凋亡的作用：不同濃度葛根提取物處理Ishikawa細(xì)胞48小時(shí)后，固定細(xì)胞，RNAase消化半小時(shí)，PI避光染色1小時(shí)，上機(jī)檢測(cè)，ModiFit軟件進(jìn)行細(xì)胞周期分析并繪制DNA分布圖。 3、RT-PCR法檢測(cè)葛根提取物、

4、雌二醇、孕激素對(duì)Ishikawa細(xì)胞ERRαmRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)作用：不同濃度葛根提取物、雌二醇、孕激素處理Ishikawa細(xì)胞48小時(shí)后，提取總RNA，進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)后，電泳、凝膠圖像分析儀器采集圖像，分析灰度值。 結(jié)果： 1、葛根提取物對(duì)Ishikawa細(xì)胞體外增殖作用有明顯的抑制作用，并隨著藥物濃度增加其抑制作用更加明顯，在一定濃度范圍內(nèi)均呈劑量依賴性。葛根提取物對(duì)Ishikawa細(xì)胞體外增殖抑制最顯著的時(shí)間是

5、加藥后48小時(shí)，加藥后72小時(shí)的抑制率雖然有所上升，但不甚明顯，加藥后96小時(shí)其抑制率稍低，加藥后120小時(shí)其抑制率明顯降低。 2、低濃度葛根提取物(10、20μmol/L)時(shí)，G0-G1期細(xì)胞比例無(wú)明顯變化。較高濃度(40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L)葛根提取物作用于Ishikawa細(xì)胞時(shí)，隨著濃度的增加而G0-G1期細(xì)胞比例明顯下降。低濃度葛根提取物(10、20μmol/L)時(shí)，G2-M期細(xì)胞比例無(wú)明顯變

6、化。較高濃度(40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L)葛根提取物作用于Ishikawa細(xì)胞時(shí)，隨著濃度的增加而G2-M期細(xì)胞比例明顯增加。葛根提取物作用于Ishikawa細(xì)胞48小時(shí)后，結(jié)果均未見(jiàn)凋亡峰出現(xiàn)。 3、低濃度(10、20、40μmol/L)葛根提取物作用于Ishikawa細(xì)胞時(shí)，ERRαmRNA的表達(dá)量隨著濃度的增加而明顯急劇下降，以40μmol/L濃度下降效果最明顯，但其作用較弱雌二醇弱。當(dāng)葛根提取物

7、濃度達(dá)到一定濃度(80、160μmol/L)時(shí)，ERRαmRNA的表達(dá)量隨著濃度的增加而上升，其作用較孕酮稍弱。 結(jié)論： 1、葛根提取物明顯抑制Ishikawa細(xì)胞體外增殖作用，并隨著藥物濃度增加其抑制作用更加明顯，在一定濃度范圍內(nèi)均呈劑量依賴性。葛根提取物對(duì)Ishikawa細(xì)胞體外增殖抑制最顯著的時(shí)間是加藥后48小時(shí)。 2、葛根提取物使Ishikawa細(xì)胞G0-G1期細(xì)胞比例下降，G2-M期細(xì)胞比例與對(duì)照組增加