HCMV可上調(diào)TLR2及炎癥因子的表達(dá)及其在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、目的：
　　1.通過檢測(cè)HCMV的IE1-72及IE1-86在結(jié)直腸癌、癌旁正常組織及結(jié)腸腺瘤中的表達(dá)情況，明確HCMV感染與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　2.進(jìn)一步檢測(cè)TLR2、TLR4及炎癥因子IL-6、IL-8及TNFα的表達(dá)情況，找出其中的規(guī)律及與HCMV的IE1表達(dá)的相關(guān)性。
　　3.根據(jù)TLR2、TLR4及炎癥因子IL-6、IL-8及TNFα的表達(dá)情況分析各因子的臨床意義，探討各炎癥因子在腫瘤微環(huán)境中的作用

2、。
　　4.HCMV感染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞系，檢測(cè)IE1、TLR2、TLR4及下游炎癥因子的表達(dá)情況，探討TLRs信號(hào)通路在HCMV感染過程中的作用。
　　方法：
　　1.收集56例結(jié)直腸癌組織，以癌旁正常腸粘膜組織及36例結(jié)腸腺瘤組織為對(duì)照，應(yīng)用RT-PCR法及免疫組化ABC法分別檢測(cè)IE1-72、IE1-86、TLR2、TLR4、NF-ΚB及炎癥因子IL-6、IL-8及TNFα的表達(dá)，進(jìn)行定性及定量分析。

3、　　2.進(jìn)一步分析TLR2、TLR4、 NF-ΚB及炎癥因子IL-6、IL-8及TNFα的表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。
　　3.建立 HCMV感染的結(jié)腸癌 SW480細(xì)胞系模型，應(yīng)用 qRT-PCR法及Western-blot法檢測(cè)感染前（0小時(shí)）、感染后6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)及72小時(shí)各時(shí)間IE1、TLR2、TLR4、NF-ΚB及IL-6、IL-8mRNA及蛋白表達(dá)的變化，應(yīng)用進(jìn)行定性及定量分析。
　　結(jié)果：

4、
　　1.結(jié)直腸癌組織中HCMV的IE1-72及IE1-86mRNA表達(dá)量均明顯高于癌旁正常組織，P<0.05。癌組織中IE1-72蛋白的表達(dá)率達(dá)44.6％，結(jié)腸腺瘤的表達(dá)率達(dá)41.7%，均明顯高于癌旁正常組織12.5%，P<0.05。
　　2.結(jié)腸癌組織 TLR2mRNA及蛋白的表達(dá)顯著高于癌旁正常組織，69.6%vs42.8%，P<0.05，癌組織中TLR4蛋白的表達(dá)顯著高于正常組織73.2%vs35.7%，P<0.05

5、。36例結(jié)腸腺瘤組織中TLR2及TLR4mRNA及蛋白的的表達(dá)量高于也于正常組織，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P>0.05。癌組織中TLR2及TLR4的表達(dá)與IE1-72蛋白的表達(dá)有正相關(guān)性。
　　3.NF-ΚBmRNA及蛋白在結(jié)直腸癌組織的表達(dá)略高于癌旁正常組織，P>0.05；TNFα、IL-6及IL-8的蛋白表達(dá)在癌組織中均顯著高于正常組織，P<0.05；癌組織中IL-6及TNFα mRNA水平高于正常組織，P<0.05。在各因子與患者的

6、臨床病理特征的相關(guān)分析中發(fā)現(xiàn)，TLR2、TLR4、TNFα、IL-6及IL-8蛋白的表達(dá)均不同程度的與臨床不良預(yù)后如脈管陽(yáng)性、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化及分期晚等有關(guān)。
　　4.SW480細(xì)胞系感染HCMV后，從6小時(shí)開始通過對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、IE1-72及IE1-86基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)，成功建立SW480細(xì)胞株的HCMV體外感染模型。
　　5.感染后6小時(shí)SW480細(xì)胞就開始少量表達(dá)IE1-72及IE1-86，并隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)表

7、達(dá)逐漸增加，致48小時(shí)達(dá)峰值，72小時(shí)后似乎有下降趨勢(shì)。
　　6.TLR2在感染前有少許表達(dá)，自感染后6小時(shí)就開始表達(dá)增加，并隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)逐漸增加，致48小時(shí)達(dá)峰值。而TLR4在感染前后表達(dá)水平隨時(shí)間無明顯變化。
　　7.NF-ΚB在感染前后表達(dá)水平隨時(shí)間無明顯變化；IL-6及IL-8在感染前基本無表達(dá)，IL-6自感染后6小時(shí)開始似有表達(dá)，并隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)逐漸增加。在感染前基本無表達(dá)，自感染后12小時(shí)就開始