2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer,RA)是里默氏桿菌屬的代表種,主要感染鴨和鵝,火雞和其他禽類及野鳥類也能感染。感染鴨呈急性敗血癥或慢性過程,以纖維素性心包炎、肝周炎和氣囊炎為特征,因病鴨死亡率高、消瘦、生長發(fā)育遲緩、品質(zhì)下降、疾病治療等給世界范圍的養(yǎng)鴨業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。鴨疫里默氏桿菌已報(bào)道的的血清型至少有21個(gè),但各血清型之間缺乏有效的交叉保護(hù),這給鴨疫里默氏桿菌病疫苗的研制帶來困難。另外,目前對(duì)于

2、鴨疫里默氏桿菌的致病機(jī)制及保護(hù)性抗原等還知之甚少。
  分泌蛋白在細(xì)菌間的信號(hào)傳遞、致病性以及免疫等方面起著重要的作用。本試驗(yàn)首先提取了鴨疫里默氏桿菌培養(yǎng)上清中的分泌蛋白,通過免疫蛋白質(zhì)組學(xué)的方法對(duì)提取的分泌蛋白中有免疫原性的蛋白進(jìn)行鑒定和分析,并比較了不同菌株間分泌蛋白點(diǎn)的差異,為分析鴨疫里默氏桿菌的毒力相關(guān)基因和保護(hù)性抗原等提供一些信息。
  1.鴨疫里默氏桿菌分泌蛋白的提取
  采用三氯乙酸(Trichloroa

3、cetic acid,TCA)-乙醇沉淀法提取了鴨疫里默氏桿菌強(qiáng)毒株HXb2(血清10型)、YXb1(血清10型)、弱毒株NJ-1(血清1型)菌株在37℃TSB培養(yǎng)基中的分泌蛋白。經(jīng)Bradford法定量,HXb2、YXb1、NJ-1株培養(yǎng)上清中分泌蛋白的濃度分別為12.34、11.16和4.52μg·μL-1。
  2.雙向凝膠電泳(2-D)鑒定分泌蛋白樣品中蛋白點(diǎn)
  對(duì)提取的三株鴨疫里默氏桿菌的分泌蛋白分別進(jìn)行雙向凝膠

4、電泳分離,經(jīng)免疫印跡技術(shù)和基質(zhì)輔助激光解吸電離/飛行時(shí)間質(zhì)譜MALDI-TOF-MS鑒定到具有免疫原性的蛋白點(diǎn)。共測定了42個(gè)蛋白點(diǎn),鑒定到了24種蛋白質(zhì)。
  經(jīng)GO(gene onthlog)蛋白質(zhì)功能分類數(shù)據(jù)庫預(yù)測分析,這24種蛋白中有18種蛋白可以預(yù)測其亞細(xì)胞定位。除了翻譯延伸因子、滑動(dòng)運(yùn)動(dòng)蛋白和分子伴侶定位在細(xì)胞質(zhì)外,其余蛋白均為膜蛋白,推測是外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)的成份。另

5、外,這24種蛋白可能參與22種生物過程(biological process)和15種分子功能(molecular function)等有關(guān)。KEGG pathway蛋白質(zhì)代謝數(shù)據(jù)庫預(yù)測18種能分析亞細(xì)胞定位的蛋白主要與碳水化合物代謝及其他氨基酸代謝有關(guān)。
  檢測的42個(gè)蛋白點(diǎn)(24種蛋白)中有36個(gè)具有免疫原性,除了三種假定蛋白(gi|516282769、gi|441482924、gi|874269116)及外膜蛋白OmpH外

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