ω-3魚(yú)油改善腸外營(yíng)養(yǎng)相關(guān)性肝病及其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)建立新生兔腸外營(yíng)養(yǎng)相關(guān)性肝病(PNALD)模型，研究新生兔肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志蛋白-糖調(diào)節(jié)蛋白94(GRP94)的表達(dá)變化，探討GRP94在PNALD發(fā)病機(jī)制中的作用，并試圖揭示魚(yú)油改善PNALD的作用機(jī)制，為臨床預(yù)防和治療PNALD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 母乳喂養(yǎng)7日的新西蘭新生兔24只，雌雄不限，隨機(jī)分為3組，對(duì)照組(Control，CON組，n=8)、全胃腸外營(yíng)養(yǎng)組（t

2、otalparenteralnutrition，TPN組，n=8）、ω-3魚(yú)油脂肪乳干預(yù)組(ω-3FishOilFatEmulsionIntervention，F(xiàn)O組，n=8）。TPN組給予全腸道外營(yíng)養(yǎng)，經(jīng)頸靜脈置入硅膠管，持續(xù)輸注靜脈TPN營(yíng)養(yǎng)液（配方組成詳見(jiàn)表1）一周；FO組（方法同TPN組）以ω-3魚(yú)油脂肪乳等量替代TPN營(yíng)養(yǎng)液中的普通脂肪乳劑；CON組給予母乳喂養(yǎng)一周。飼養(yǎng)于恒溫暖箱，溫度維持在26～28℃之間，相對(duì)濕度40％～

3、60％，根據(jù)體重調(diào)節(jié)輸液量，按24oml.kg-1.d-1。造模結(jié)束后，檢測(cè)三組血清生化指標(biāo)變化；取三組肝臟組織行病理切片檢測(cè)；采用半定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鍵式反應(yīng)法(RT-PCR)檢測(cè)三組肝臟組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)標(biāo)識(shí)蛋白—糖調(diào)節(jié)蛋白94(GRP94)mRNA的表達(dá)；另取三組肝臟組織采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)肝臟組織中三組GRP94蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.血清生化指標(biāo)水平：TBIL、DBIL、γ-GT、ALB在三組間

4、比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而TP、AL、ALP、TG、TC、PA水平在三組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。與CON組比較，TPN組血清TBIL（50.25±3.06）μmol/Lvs（2.28±1.04）μmol/L、DBIL（47.28±3.91）μmol/Lvs（1.05±0.57）μmol/L、γ-GT（130.47±5.61）IU/Lvs（14.33±5.46）IU/L均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)

5、，ALB(11.73±1.05)g/Lvs（26.86±2.83）g/L明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；而FO組與CON組比較，血清TBIL(3.28±1.69)μmol/Lvs(2.28±1.04)μmol/L、DBIL(1.76±0.86)μmol/Lvs(1.05±0.57)μmol/L、γ-GT(14.33±5.45)IU/Lvs(11.28±5.68)IU/L、ALB(26.29±3.12)g/Lvs（26.86±

6、2.83）g/L均無(wú)明顯差異(P＞0.05)；與TPN組比較，F(xiàn)O組血清TBIL（3.28±1.69）μmol/Lvs(50.25±3.06)μmol/L、DBIL(1.76±0.86)μmol/Lvs(47.28±3.91)μmol/L、γ-GT（14.33±5.45）IU/Lvs（130.47±5.61）IU/L均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)．ALB（26.29±3.12）g/Lvs（11.73±1.05）g/L明顯升

7、高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 2．肝臟組織學(xué)變化：與CON組相比，TPN組肝臟組織可見(jiàn)肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞彌漫脂肪空泡變性，門脈區(qū)可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)明顯膽管增生及膽汁淤積。而FO組肝細(xì)胞索形態(tài)正常，僅可見(jiàn)少量肝細(xì)胞脂肪變性，偶見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，匯管區(qū)小葉間膽管無(wú)增生，膽管無(wú)擴(kuò)張。
　　 3．內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志蛋白GRP94蛋白表達(dá)：免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，與CON組相比，TPN組肝臟組織GRP94

8、蛋白表達(dá)灰度值（133.838±13.664vs78.138±8.169）明顯升高(P＜0.01)，F(xiàn)0組肝臟組織GRP94蛋白表達(dá)灰度值（80.727±9.356vs78.138±8.169）與CON組比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)，但與TPN組相比，F(xiàn)O組肝臟組織GRP94蛋白表達(dá)灰度值（80.727±9.356vs133.838±13.664）明顯降低(P＜0.01)。
　　 4．內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志蛋白GRP94mRNA表

9、達(dá)：RT-PCR結(jié)果顯示，與CON組相比，TPN組新生白兔肝臟組織GRP94mRNA表達(dá)灰度值（1.217±0.113vs0.614±0.034）明顯升高(P＜0.01)，F(xiàn)O組肝臟組織GRP94mRNA表達(dá)灰度值（0.661±0.117vs0.614±0.034）與CON組比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)，但與TPN組相比，F(xiàn)O組肝臟組織GRP94mRNA表達(dá)灰度值（0.661±0.117vsl.217±0.113）明顯降低(P＜0.0