檸檬醛和辛醛對(duì)指狀青霉孢子萌發(fā)的影響.pdf

1、指狀青霉(Penicillium digitatum)侵染引起的綠霉病是柑橘果實(shí)最嚴(yán)重的采后病害之一。檸檬醛、辛醛是植物精油中具有潛在抑菌作用的兩種天然成分，對(duì)多種果蔬采后致病真菌有較強(qiáng)的抑制作用。我們前期研究表明，檸檬醛和辛醛對(duì)指狀青霉菌絲體生長(zhǎng)都有良好抑制作用，但其對(duì)指狀青霉孢子萌發(fā)的影響目前尚不明確。本研究擬以指狀青霉孢子為研究對(duì)象，探討檸檬醛、辛醛對(duì)指狀青霉孢子萌發(fā)的影響。具體研究指標(biāo)如下：孢子形態(tài)學(xué)觀察，細(xì)胞膜通透性和完整性的

2、檢測(cè)，氧化脅迫，膜脂過氧化相關(guān)的過氧化氫酶(CAT)、過氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶(SOD)酶活。主要研究結(jié)果如下：
　　(1)通過篩選，最終采用整橘回接的方法獲取指狀青霉孢子，平均每個(gè)果實(shí)的孢子收率為3.62±0.05g，此方法能獲取的孢子量大、活力和純度高、形態(tài)均為均勻，可用作后續(xù)的分析。
　　(2)分別采用半固體水瓊脂培養(yǎng)和液體PDB培養(yǎng)法測(cè)定了檸檬醛、辛醛處理對(duì)指狀青霉孢子萌發(fā)率的影響。結(jié)果表明：不同濃度檸檬

3、醛（0.25～8.00μL/mL）和不同濃度辛醛（0.25～2.00μL/mL）對(duì)指狀青霉孢子萌發(fā)均有一定的抑制作用，當(dāng)檸檬醛和辛醛濃度分別為4.00μL/mL和2.00μL/mL時(shí)，對(duì)應(yīng)的孢子萌發(fā)率分別為11.07％和15.29%，顯著低于對(duì)照組75.82%和72.62%（p<0.05）。
　　(3)指狀青霉孢子形態(tài)的光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果表明：對(duì)照組指狀青霉孢子大小均一，飽滿圓潤(rùn)，形狀規(guī)則，結(jié)構(gòu)完整且內(nèi)部質(zhì)在光鏡下有較好的呈現(xiàn)，而

4、處理組的孢子形態(tài)則出現(xiàn)不同程度的干癟、凹陷、褶皺和破裂等損傷，并且隨著濃度的增加和處理時(shí)間的延長(zhǎng)，孢子受損傷的程度增加，數(shù)目增多，表明檸檬醛、辛醛處理破壞了孢子的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。
　　(4)通過測(cè)定電導(dǎo)率，OD260nm和PI熒光染色來探討檸檬醛和辛醛對(duì)指狀青霉孢子細(xì)胞膜的影響。結(jié)果表明：檸檬醛和辛醛處理后，指狀青霉孢子的電導(dǎo)率上升，其中檸檬醛處理組由16.03μs/cm增加到146.40μs/cm，辛醛處理組由50.9μs/cm增加到

5、113.0μs/cm。隨著處理時(shí)間和濃度的增加，OD260nm隨著增加，檸檬醛處理組OD260nm由0.219上升到0.726，辛醛處理組由0.235上升為0.425。PI熒光染色結(jié)果表明：檸檬醛處理組細(xì)胞膜完整率由100%降低為66.4%(p<0.05)，辛醛處理組細(xì)胞膜完整性由100%降低為67.2%(p<0.05)，說明檸檬醛、辛醛處理后指狀青霉孢子細(xì)胞膜通透性和細(xì)胞膜完整率被破壞。
　　(5)通過測(cè)定指狀青霉孢子體內(nèi)H2O

6、2和活性氧(ROS)含量，丙二醛(MDA)含量和過氧化氫酶(CAT)、過氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性變化來確定檸檬醛、辛醛處理是否對(duì)指狀青霉孢子細(xì)胞膜造成了膜脂過氧化傷害。結(jié)果顯示，經(jīng)過檸檬醛和辛醛處理120min后，檸檬醛處理組的H2O2含量增加2.5倍，ROS水平上升2.9倍，總MDA含量提高9倍；辛醛處理組的H2O2含量增加4.1倍，ROS水平上升2.3倍，總MDA含量提高5倍，處理0～30min，4.00μL

7、/mL檸檬醛處理組CAT活性超過9.5倍，POD活性增加將近11倍，SOD活性增加14倍；2.00μL/mL辛醛處理組三種酶活力增加的倍數(shù)分別為10、5.1和2.7倍(p<0.05)。兩種處理60min后三種酶活均處于較低水平，甚至失去活性，暗示著檸檬醛、辛醛處理后指狀青霉孢子內(nèi)H2O2及ROS大量生成，MDA過度積累，從而形成對(duì)指狀青霉孢子的氧化脅迫，引起了孢子的膜脂過氧化傷害，使孢子逐漸凋亡，并失去萌發(fā)力。
　　本論文結(jié)果表明