龍葵體外抗腫瘤活性部位的篩選及化學(xué)成分研究.pdf

1、龍葵（SolanumnigrumL.）為茄科茄屬植物龍葵的干燥全草，有清熱解毒、活血散瘀、利水消腫、止咳祛痰等功效。廣泛用于治療癌癥、炎癥、痢疾、感冒發(fā)熱、牙痛、功能性子宮出血、毒蛇咬傷、疔瘡、帶狀皰疹等多種疾病。
　　 本文主要進(jìn)行了龍葵體外抗胃、肝癌活性部位篩選、活性部位化學(xué)成分分析、生物堿類單體成分體外抗胃、肝癌活性篩選及作用機(jī)制初探三個(gè)方面的研究，旨在通過體外藥理研究和化學(xué)成分研究探討龍葵體外抗腫瘤作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。

2、>　　 第一部分：龍葵體外抗胃、肝癌活性部位篩選。包括：
　　 1.本文選取體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、人肝癌細(xì)胞HepG2、人胃癌細(xì)胞MGC-803為模型，以半數(shù)抑制濃度（IC50）為指標(biāo)，采用MTT法考察了龍葵水提液和醇提液對(duì)上述腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果表明，龍葵水提液和醇提液對(duì)三種腫瘤細(xì)胞均有顯著的增殖抑制作用，且呈明顯的濃度-效應(yīng)依賴關(guān)系。應(yīng)用倒置顯微鏡觀察龍葵水提液和醇提液對(duì)上述細(xì)胞形態(tài)的影響，結(jié)果表

3、明，龍葵水提液和醇提液可顯著改變?nèi)N癌細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)。
　　 2.采用經(jīng)典的植物化學(xué)分離路線，將龍葵的醇提物分成了五個(gè)萃取部位，分別是石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水溶性部位。采用MTT法、細(xì)胞形態(tài)觀察法對(duì)各萃取部位進(jìn)行了體外抗胃、肝癌活性篩選，結(jié)果表明，龍葵石油醚部位和正丁醇部位對(duì)SMMC-7721、HepG2、MGC-803細(xì)胞均有明顯的增值抑制作用，呈劑量依賴關(guān)系，并且可使上述細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生顯著變化。

4、r>　　 3.采用酸溶堿沉法自龍葵正丁醇部位分離得到了兩種生物堿類成分，采用大孔吸附樹脂法和丙酮沉淀法自龍葵正丁醇部位分離得到了兩種皂苷類成分，采用蒸餾水及堿溶液煎煮法、Sevag除蛋白法和雙氧水脫色法分離純化得到了龍葵水溶性多糖和堿溶性多糖。并采用MTT法、細(xì)胞形態(tài)觀察法對(duì)上述成分進(jìn)行了體外抗胃、肝癌活性篩選，結(jié)果表明，龍葵生物堿、皂苷類成分能顯著抑制人肝癌SMMC-7721、HepG2細(xì)胞，人胃癌MGC-803細(xì)胞的增值，并明顯改

5、變上述三種細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)，是龍葵體外抗胃、肝癌的活性成分，而兩種多糖類成分對(duì)這三種癌細(xì)胞基本無(wú)活性。
　　 第二部分：龍葵活性部位化學(xué)成分分析。包括：
　　 1.采用水蒸氣蒸餾法自龍葵石油醚部位分離得到了揮發(fā)油成分，并采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了化學(xué)成分分析，結(jié)果鑒定出了49個(gè)組分，占總出峰面積的97.32％，分析結(jié)果表明石油醚部位揮發(fā)油的成分主要為酯類、烷烴類、脂肪酸類和酮類。
　　 2.利用化學(xué)鑒定法對(duì)龍

6、葵生物堿、皂苷類成分進(jìn)行了定性分析，分別采用酸性染料法、香草醛-高氯酸比色法、苯酚-硫酸法對(duì)龍葵生物堿、皂苷、多糖類成分進(jìn)行了含量測(cè)定。
　　 第三部分：龍葵生物堿類單體成分體外抗腫瘤活性篩選及作用機(jī)制初探。
　　 1.結(jié)合MTT法、細(xì)胞形態(tài)觀察法對(duì)龍葵中的主要生物堿類單體成分澳洲茄堿、澳洲茄邊堿、ε-龍葵堿進(jìn)行了體外抗胃、肝癌活性篩選。MTT結(jié)果表明，澳洲茄邊堿對(duì)人肝癌SMMC-7721、人胃癌MGC-803細(xì)胞有顯著

7、的細(xì)胞毒作用。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)發(fā)現(xiàn)澳洲茄邊堿可使SMMC-7721、HepG2、MGC-803細(xì)胞發(fā)生多種形式的形態(tài)變化。
　　 2.采用流式細(xì)胞術(shù)研究了不同劑量的澳洲茄邊堿對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721細(xì)胞周期分布的影響，分析結(jié)果顯示，澳洲茄邊堿可使SMMC-7721細(xì)胞阻滯于G2/M期，且呈明顯的濃度-效應(yīng)依賴關(guān)系；當(dāng)藥物作用細(xì)胞濃度為15μg/mL時(shí)，可誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡。說(shuō)明澳洲茄邊堿可通過影響細(xì)胞周期