池蝶蚌性別相關(guān)基因Transformer-2α的分子特征及在不同組織和不同發(fā)育階段的表達(dá)分析.pdf

1、池蝶蚌（Hyriopsis schlegelii）是日本獨(dú)特品種，產(chǎn)自日本滋賀縣的琵琶湖，其育珠能力及抗病能力均優(yōu)于其他淡水珍珠蚌。本課題以池蝶蚌為實(shí)驗(yàn)對象，取材于4齡健康成熟個體性腺組織，通過SMART RACE PCR及巢式PCR技術(shù)克隆獲得性別相關(guān)基因Transformer-2α（以下簡稱：Hs-Tra2α）的ORF（Open reading frame）框序列及上下游非編碼區(qū)序列，運(yùn)用生物信息學(xué)方法對其結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了分析。

2、>　　Hs-Tra2α基因cDNA全長1051bp，其中5’ UTR（Untranslated Region）長75bp，3’ UTR長139bp，包括加尾信號：AATAAA保守區(qū)序列及下游豐富的poly（A）序列；ORF框序列長837bp，編碼由278個氨基酸組成的親水蛋白質(zhì)，理論等電點(diǎn)為PI=11.42，分子質(zhì)量約為32715.88Da，經(jīng)在線預(yù)測，Hs-Tra2α蛋白細(xì)胞亞定位于細(xì)胞核。結(jié)構(gòu)域檢測分析表明：Hs-Tra2α蛋白質(zhì)含

3、有SR蛋白（serine/arginine-rich splicing factor, SRSF）家族的高度保守的精氨酸（R）和絲氨酸（A）二肽富集結(jié)構(gòu)域（RS Domain）和RNA識別基元（RNA recognition motif, RRM），也叫RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RNA binding domain,RBD），RRM結(jié)構(gòu)域下游含有Tra2家族特異性Linker連接區(qū)序列。利用predictprotein在線預(yù)測其蛋白二級結(jié)構(gòu)顯示

4、Hs-Tra2α蛋白含有大量的無規(guī)則卷曲，在RRM結(jié)構(gòu)域區(qū)域呈現(xiàn)α螺旋和β折疊交替排列；采用SWISS-MODEL在線預(yù)測了Hs-Tra2α蛋白的三維結(jié)構(gòu)模型與二級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果一致，在RRM結(jié)構(gòu)域可見α螺旋和β折疊交錯排列，可明顯看到β1α1β2β3α2β4結(jié)構(gòu)存在；根據(jù)氨基酸與其他物種的同源性，利用Mega4.0軟中鄰位連接法構(gòu)建了Hs-Tra2α氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹，結(jié)果顯示Hs-Tra2α在進(jìn)化樹上與太平洋牡蠣Tra2α并為一支

5、，在進(jìn)化地位上相當(dāng)保守。
　　采用實(shí)時熒光定量技術(shù)對Hs-Tra2α基因在4齡成熟池蝶蚌精巢、卵巢、外套膜、心臟、閉殼肌、肝胰腺、腸、腎、血淋巴、斧足、鰓共11個組織中的mRNA表達(dá)進(jìn)行了檢測分析，結(jié)果顯示：Hs-Tra2α基因普遍地在各個組織中獲得表達(dá)，不同組織間存在明顯的差異性，在精巢和卵巢中表達(dá)量最高，表達(dá)量分別為血淋巴中的53.67倍和23.47倍，表明Hs-Tra2α基因在池蝶蚌不同組織中具有多種生理功能。由于其在性腺中

6、的高表達(dá)，我們重點(diǎn)對Hs-Tra2α基因在精巢和卵巢1~5齡不同發(fā)育階段的表達(dá)進(jìn)行了檢測分析，結(jié)果顯示Hs-Tra2α基因在精巢和卵巢的不同發(fā)育階段均得到表達(dá)，且存在明顯的差異性，Hs-Tra2在1~5齡精巢和卵巢中的表達(dá)量隨著性腺的形成、增殖、生長及成熟呈現(xiàn)規(guī)律性變化，Hs-Tra2α在1齡和2齡階段性腺形成和增殖期有一定量的表達(dá)，在2齡和3齡階段性腺生長、成熟期表達(dá)量顯著增加，其中在卵巢3齡階段表達(dá)量最高，達(dá)1齡階段的10.66倍，