青花菜、花椰菜離體再生體系及青花菜雄核發(fā)育體系的建立.pdf

1、第一部分：分析評價了影響青花菜、花椰菜高效再生體系建立的諸多影響因子，其中包括：外植體的基因型，外植體的類型，苗齡，生長調(diào)節(jié)劑的種類、濃度、配比，硝酸銀濃度，培養(yǎng)基的有機(jī)成分對再生芽數(shù)量和質(zhì)量的影響；并研究了再生植株生根所需要的條件。結(jié)果表明：適合青花菜芽再生的分化培養(yǎng)基是mMS(MS大量元素+PG-96有機(jī)成分)+0.5mgl-1NAA+3.0mgl-1BA+4.0mgl-1AgNO3+3％蔗糖，在該培養(yǎng)基上，品種碧杉子葉再生芽分化率

2、最高，達(dá)到4.1個/外植體；生根培養(yǎng)基為：MS+0.2mgl-1NAA+2％蔗糖。適合花椰菜芽再生的分化培養(yǎng)基是mMS(MS大量元素+PG-96有機(jī)成分)+0.5mgl-1NAA+3.0mgl-1BA+0.25mgl-1TDZ+2.0mgl-1AgNO3+3％蔗糖，在該培養(yǎng)基上，品種賽雪下胚軸再生芽分化率最高，達(dá)到18.1個/外植體；生根培養(yǎng)基為：MS+0.4mgl-1IBA+2％蔗糖。目前，試驗中共得到500株以上表型正常的再生苗。利

3、用RAPD技術(shù)，從分子水平檢測再生植株遺傳穩(wěn)定性。在青花菜材料上所使用的62條隨機(jī)引物中有20條在青花菜材料上可以得到擴(kuò)增產(chǎn)物；在花椰菜材料上所使用的40條隨機(jī)引物中有15條得到擴(kuò)增產(chǎn)物。在青花菜材料上共檢測了79個位點，未發(fā)現(xiàn)品種內(nèi)出現(xiàn)體細(xì)胞無性系變異；在花椰菜材料上共檢測了75個位點，也未發(fā)現(xiàn)品種內(nèi)出現(xiàn)體細(xì)胞無性系變異。從而證明所獲得的高效再生體系在遺傳上是穩(wěn)定的，可以用于下一步遺傳轉(zhuǎn)化工作。 第二部分：選用六個F1青花菜進(jìn)

4、行花藥培養(yǎng)和游離小孢子培養(yǎng)，對影響其培養(yǎng)效果的若干因素進(jìn)行比較研究?；ㄋ幣囵B(yǎng)試驗中，供試的六份材料全部得到花粉愈傷組織；游離小孢子培養(yǎng)試驗中，供試的六份材料有四份得到胚狀體。試驗結(jié)果表明：基因型是影響雄核發(fā)育的關(guān)鍵因素。小孢子處于單核晚期至雙核早期有利于花粉愈傷組織和胚狀體的形成。4℃低溫預(yù)處理4天以及32.5℃熱激24小時有利于花粉愈傷組織的產(chǎn)生和胚狀體的形成?；ㄋ幣囵B(yǎng)最佳培養(yǎng)密度為每培養(yǎng)皿接種30個花藥；花粉培養(yǎng)最佳培養(yǎng)密度4×10

5、5個小孢子/ml。在花藥和花粉誘導(dǎo)培養(yǎng)中，PG-96培養(yǎng)基培養(yǎng)效果優(yōu)于NLN培養(yǎng)基。在基因型一定的情況下，生長調(diào)節(jié)劑的種類和濃度決定小孢子向花粉愈傷組織方向發(fā)展還是向花粉胚方向發(fā)展。低濃度BA有利于小孢子成胚，而高濃度2，4-D有利于小孢子形成花粉愈傷組織。培養(yǎng)初期，培養(yǎng)基中添加10％的蔗糖有利于花藥培養(yǎng)；添加13％的蔗糖有利于游離小孢子培養(yǎng)。目前為止，我們通過花藥培養(yǎng)和花粉培養(yǎng)，獲得了70株花粉植株。染色體記數(shù)表明，所得花粉植株包括二