針刺對大鼠高眼壓狀態(tài)下視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用.pdf

1、青光眼是我國主要的致盲眼病之一，以視神經(jīng)損害為其主要特征。其發(fā)病機(jī)制通?？梢詺w納為兩大類：機(jī)械學(xué)說及血流學(xué)說，但均不完整。近年來，隨著生物學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)，青光眼中一部分視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞可以通過細(xì)胞凋亡這一機(jī)制而死亡，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡常導(dǎo)致視功能發(fā)生不可逆性損害。 長期以來，降低眼壓一直是針灸治療的主要目的。近年來的研究表明，針灸治療除了能降低眼壓外，還能通過針刺使Bcl-2抑制凋亡基因表達(dá)增多，Ba

2、x促進(jìn)凋亡基因表達(dá)減少及Bcl-2/Bax的比值升高；減少高眼壓模型大鼠視網(wǎng)膜一氧化氮(NO)含量，或阻止其過量生成，從而維持或改善視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)生存微環(huán)境等來影響神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡，因此通過針刺在一定程度保護(hù)高眼壓下的視神經(jīng)。 目的：探討針刺對持續(xù)性高眼壓下大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用，并對其作用機(jī)理進(jìn)行初步探討，明確針刺在青光眼視神經(jīng)保護(hù)方面的作用，為針刺治療青光眼提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1

3、. 研究對象 正常對照組：SD大鼠12只模型對照組：SD大鼠12只針刺治療組：SD大鼠12只2 造模方法：采用Akria法，烙閉大鼠雙眼3支上鞏膜靜脈。制作大鼠持續(xù)性高眼壓模型。 3. 術(shù)后一、二、三天用筆式眼壓計TONO-PEN測量大鼠眼壓。 4. 造模后一周給予針刺治療組針刺睛明、太沖穴進(jìn)行治療一個月，同時每周測眼壓一次。 5. 取視網(wǎng)膜進(jìn)行視網(wǎng)膜光鏡形態(tài)學(xué)觀察、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層厚度測量；免疫組化染色法觀

4、察RGCs凋亡基因陽性率；采用硝酸還原酶法測定視網(wǎng)膜NO的含量。 6 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.0 for windows統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。多組間比較用單因素方差分析，組間兩兩比較，自身前后對照比較用配對t檢驗(yàn)，各項(xiàng)指標(biāo)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示。 結(jié)果： 1. 模型眼及對照眼各16只，大鼠雙眼造模前三天模型眼眼壓為12.48±1.04mmHg，對照眼眼壓為12.53±1.15 mmHg，所有大鼠雙眼眼壓

5、經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理均無顯著性差異(P>0.05)，具有可比性；造模后三天，模型眼眼壓為19.96±2.11mmHg，與造模前及對照眼比較均有顯著性差異(P<0.01)；造模后一月模型眼眼壓為18.88±2.66mmHg，對照眼眼壓為12.6±1.57mmHg，造模后一月模型眼眼壓有所下降，但與對照眼、造模前比較均有顯著性差異(P<0.01=。 2. 正常眼、模型眼及對照眼各16只，造模前正常對照組眼壓為12.04±1.10mmHg，模

6、型對照組眼壓為12.56±1.05mmHg，針刺治療組眼壓為13.08±1.06mmHg，各組大鼠眼壓經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理無顯著性差異(P>0.05)；造模后針刺前，正常對照組眼壓為11.90±1.19mmHg，模型對照組眼壓為20.15±2.56mmHg，針刺治療組眼壓為19.81±1.72mmHg，模型對照組及針刺治療組眼壓與正常對照組及造模前比較有顯著性差異(P<0.05)；針刺一個月時，正常對照組眼壓為13.88±0.90mmHg，模型

7、對照組眼壓為19.94±2.95mmHg，針刺治療組眼壓為16.65±1.81mmHg，針刺治療組與造模后針刺前有顯著性差異(P<0.01)；針刺一個月時，針刺治療組及正常對照組眼壓與模型對照組比較有顯著性差異(P<0.05)。 3. 正常眼、模型眼及對照眼各8只，正常對照組RGCs厚度為264.51±40.53um，模型對照組RGCs厚度為179.07±62.70um，針刺治療組RGCs厚度為207.22±43.51um，模型

8、對照組與針刺治療組RGCs厚度與正常對照組比較，均明顯低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；針刺治療組與模型對照組相比，RGCs厚度增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 4. 正常眼、模型眼及對照眼各8只，正常眼、模型眼及對照眼Bcl-2陽性率分別為1.49±0.31％、0.33±0.47％、0.75±0.96％，模型對照組與針刺治療組的Bcl-2陽性率均明顯低于正常對照組，具有顯著性差異(P<0.05～0.01

9、)；與模型對照組比較，針刺治療組Bcl-2表達(dá)陽性率較強(qiáng)，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性意義(P<0.05)。 5. 正常眼、模型眼及對照眼各8只，正常眼、模型眼及對照眼Bax陽性率分別為1.62±0.91％、4.14±1.31％、2.92±1.19％，模型對照組與針刺治療組的Bax陽性率均明顯高于正常對照組，具有顯著性差異(P<0.05～0.01)；與模型對照組比較，針刺治療組Bax表達(dá)陽性率較弱，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性意義(P<0.05)。

10、 6. 正常眼、模型眼及對照眼各8只，正常眼、模型眼及對照眼Bcl-2/Bax比值分別為1.54±0.76、0.54±0.46、1.08±0.84，模型對照組與針刺治療組的Bcl-2/Bax比值均明顯低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與模型對照組比較，針刺治療組表達(dá)的陽性率較強(qiáng)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 7.正常眼、模型眼及對照眼各7只，正常眼、模型眼及對照眼NO含量分別為42.42±1.36mol/

11、g、59.41±5.36 mol/g、51.40±2.03 mol/g，模型對照組與針刺治療組的視網(wǎng)膜NO含量與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05～0.01)；針刺治療組大鼠視網(wǎng)膜NO含量與模型對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：Akria性高眼壓大鼠在高眼壓持續(xù)1個月后，表現(xiàn)出視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞免疫組織化學(xué)的病理改變。針刺能夠防止或減輕視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡，從而阻止或減輕高眼壓下的視神經(jīng)損傷，其作用機(jī)