ATF3活化及其靶基因表達(dá)與肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：從蛋白水平上，檢測肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)組織芯片中ATF3、MMP-2及maspin的表達(dá)情況和手術(shù)切除新鮮肝癌標(biāo)本中ATF3的DNA結(jié)合活性，探討組織芯片中ATF3、MMP-2及maspin的表達(dá)與HCC侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其意義，及新鮮肝癌標(biāo)本中ATF3的DNA結(jié)合活性與HCC侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其意義。 方法：對手工制作組織芯片的方法進(jìn)行改良，構(gòu)建含有HCC、癌旁肝組織、遠(yuǎn)癌肝組

2、織、正常肝組織及肝內(nèi)轉(zhuǎn)移灶的組織芯片，應(yīng)用免疫組化及彩色圖像分析技術(shù)從蛋白質(zhì)水平上檢測了126例HCC、126例癌旁肝組織、81例遠(yuǎn)癌肝組織、20例正常肝組織和33例肝內(nèi)轉(zhuǎn)移灶中ATF3、MMP-2和maspin的表達(dá)情況，同時收集新鮮肝癌標(biāo)本，利用凝膠電泳遷移率分析法(Electrophoretic Mobility ShiftAssay，EMSA)檢測其中的26例HCC、10例癌旁肝組織中ATF3的DNA結(jié)合活性情況，并綜合分析AT

3、F3、MMP-2和maspin的表達(dá)，ATF3的DNA結(jié)合活性與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系及其意義。 結(jié)果： 1、利用改良的手工制作組織芯片方法構(gòu)建7個含有HCC、癌旁肝組織、遠(yuǎn)癌肝組織、正常肝組織以及肝內(nèi)轉(zhuǎn)移灶共185個點(diǎn)的芯片蠟塊。其中中間列5個點(diǎn)為陽性對照點(diǎn)及標(biāo)志點(diǎn)。所有蠟塊點(diǎn)陣排列整齊，無裂紋，能完整切下。芯片經(jīng)H-E、免疫組化染色后切片有效率達(dá)95％以上，芯片組織符合鏡下組織學(xué)觀察和進(jìn)一步研究的需要。 2、免

4、疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示ATF3及MMP-2在HCC中表達(dá)高于癌旁肝組織、遠(yuǎn)癌肝組織和正常肝組織(P<0.01)，maspin在HCC中的表達(dá)明顯低于癌旁肝組織、遠(yuǎn)癌肝組織和正常肝組織(P<0.01)。 3、ATF3蛋白在轉(zhuǎn)移組中表達(dá)高于無轉(zhuǎn)移組(P＜0.01)，在女性HCC患者中的表達(dá)量高于男性患者(P＜0.01)。此外，ATF3蛋白的表達(dá)與腫瘤大小、包膜侵犯、組織學(xué)類型以及病理學(xué)分級均無關(guān)(P＞0.05)。MMP-2蛋白在包膜

5、侵犯組中表達(dá)高于無包膜侵犯組(P＜0.05)，肝內(nèi)轉(zhuǎn)移灶表達(dá)量高于原發(fā)灶(P＜0.05)，在直徑大于3cm的HCC中的表達(dá)量高于直徑小于3cm的(P＜0.05)，但是MMP-2蛋白隨HCC病理學(xué)分級的升高，相對表達(dá)量降低(P＜0.05)。此外，MMP-2蛋白的表達(dá)與性別、組織學(xué)類型均無關(guān)(P＞0.05)。ATF3隨著HCC的轉(zhuǎn)移進(jìn)展表達(dá)量逐漸增高，MMP-2亦隨著HCC的包膜侵襲、轉(zhuǎn)移進(jìn)展表達(dá)量逐漸增高，然而maspin卻隨著HCC病理

6、學(xué)分級的升高，相對表達(dá)量降低(P＜0.05)。此外，maspin蛋白的表達(dá)與性別、腫瘤大小、包膜侵犯、組織學(xué)類型以及轉(zhuǎn)移情況均無關(guān)(P＞0.05)。 4、ATF3蛋白表達(dá)與MMP-2表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05)，與maspin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.01)；MMP-2蛋白表達(dá)與maspin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。 5、EMSA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：ATF3蛋白在HCC中的DNA結(jié)合活性明顯高于癌旁肝組織(P＜0.01)；在H

7、CC組織中，轉(zhuǎn)移組ATF3的DNA結(jié)合活性顯著高于無轉(zhuǎn)移組(P＜0.05)；此外，ATF3的DNA結(jié)合活性與HCC患者年齡、性別、組織學(xué)類型、腫瘤大小、包膜侵犯、病理學(xué)分級均無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。 結(jié)論： 1、ATF3蛋白在轉(zhuǎn)移組中表達(dá)高于無轉(zhuǎn)移組，在女性HCC患者中的表達(dá)量高于男性患者。此外，ATF3蛋白表達(dá)與腫瘤大小、包膜侵犯、組織學(xué)類型以及病理學(xué)分級均無關(guān)。 2、MMP-2蛋白在包膜侵犯組中表達(dá)高于

8、無包膜侵犯組，肝內(nèi)轉(zhuǎn)移灶表達(dá)量高于原發(fā)灶，在直徑大于3cm的HCC中的表達(dá)量高于直徑小于3cm的，但是MMP-2蛋白隨HCC病理學(xué)分級的升高，相對表達(dá)量降低。此外，MMP-2蛋白的表達(dá)與性別、組織學(xué)類型以及轉(zhuǎn)移情況均無關(guān)。ATF3及MMP-2均隨著HCC進(jìn)展表達(dá)量升高，然而maspin卻隨著HCC病理學(xué)分級的升高，相對表達(dá)量降低。此外，maspin蛋白的表達(dá)與性別、腫瘤大小、包膜侵犯、組織學(xué)類型以及轉(zhuǎn)移情況均無關(guān)。 3、ATF3

9、蛋白和MMP-2蛋白在肝癌組織中高表達(dá)，而maspin蛋白在肝癌組織中低表達(dá)。ATF3蛋白表達(dá)與MMP-2表達(dá)呈正相關(guān)，與maspin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；MMP-2蛋白表達(dá)與maspin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。在肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程中，ATF3和MMP-2、maspin之間存在相互調(diào)控機(jī)制。 4、在EMSA檢測結(jié)果中，ATF3的DNA結(jié)合活性在HCC中高于癌旁肝組織，轉(zhuǎn)移組ATF3的DNA結(jié)合活性高于無轉(zhuǎn)移組。提示ATF3的DNA結(jié)合活性與HCC