牛磺酸對重癥急性胰腺炎大鼠Kupffer細(xì)胞P38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響.pdf

1、目的:用牛磺酸（Taurine）對重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）大鼠進行預(yù)處理，采用聯(lián)合酶原位灌注法分離枯否細(xì)胞（Kupffer cells，KCs），檢測KCs中P38-絲裂原蛋白激酶（P38mitogen activated protein kinase，P38MAPK）的蛋白量和其活化水平以及核因子-κB（Nuclear factor-kappaB，NF-κB）的活性，探討?；撬釋χ匕Y

2、急性胰腺炎大鼠KCs內(nèi)P38MAPK的影響以及對分泌促炎細(xì)胞因子的作用。 方法:48只雄性SD大鼠采用完全隨機法分為：①假手術(shù)對照組（sham operation，SO）；②重癥急性胰腺炎組（SAP）；③?；撬犷A(yù)處理組（Tau）。SAP模型通過胰膽管逆行注射5％?；悄懰徕c誘導(dǎo)，造模前Tau組分別于24h和12h從尾靜脈內(nèi)注入牛磺酸（300mmol/L，1.0ml/100g），其它組注入等量的生理鹽水。假手術(shù)或造模后分別于12h和

3、24h處死動物，檢測其血清中AST、ALT和AMS含量；然后采用聯(lián)合酶原位灌注法分離KCs，采用蛋白免疫印跡法和免疫細(xì)胞化學(xué)法（western blot and immunocytochemical method）檢測P38MAPK的蛋白量及其活化水平，凝膠電泳遷移率法（electrophoretic mobility analysis，EMSA）檢測KCs中NF-κB的表達(dá)，并用免疫酶聯(lián)吸附法（enzyme linkedimmunos

4、orbent assay，ELISA）檢測KCs培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-1β蛋白含量。 結(jié)果:①12h和24h血清中AST、ALT和AMS含量在SAP組最高（734.25±64.25 U/L、308.75±31.50 U/L、916.75±143.64 U/L并865.75±86.19 U/L、368.13±35.88 U/L、1136.75±201.15 U/L），均較SO組（198.48±24.50 U/L、75.13

5、±16.60 U/L、303.75±42.55U/L和286.46±28.32 U/L、109.50±24.40 U/L、368.88±74.81 U/L）明顯升高（P<0.01）；而Tau組血清中AST、ALT和AMS含量居前兩組之間（413.70±50.65 U/L、189.68±23.81 U/L、560.25±85.14U/L和530.75±50.50 U/L、241.13±26.67 U/L、757.27±116.75U/L）

6、，較SAP組比明顯降低（P<0.05）。②雖然三組大鼠KCs中的P38MAPK的蛋白量無明顯差別（P>0.05），但12h和24h SAP組大鼠KCs中磷酸化P38MAPK水平最高（0.9852±0.0897和1.0315±0.0916），均較SO組（0.6438±0.0215和0.7214±0.0484）顯著增高（P<0.01），而Tau組居前兩組之間（0.7713±0.0819和0.8835±0.0685），與SAP組相比有統(tǒng)計學(xué)意

7、義（P<0.05）。③12h和24hNF-κB的活性在SAP組大鼠KCs中最高（224.28±22.67和285.47±46.65），SO組活性最低（148.63±17.44和153.61±11.07），兩組比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），Tau組活性居前兩組之間（185.93±16，59和206.12±18.66），但較SAP組明顯降低（P<0.01）。④12h和24h SAP組大鼠KCs培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-1β蛋白

8、含量最高（885±156.7ug/L、798±143.7 ug/L和1068±241.5 ug/L、971±203.1ug/L），較SO組（201±34.8 ug/L、247±48.4 ug/L和238±51.4 ug/L、431±61.2 ug/L）明顯增高（P<0.01），但Tau組大鼠KCs培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-1β蛋白含量居前兩者之間（551±176.5 ug/L、547±56.8 ug/L和846±208.7 ug/L

9、、724±142.6 ug/L），與SAP組比較明顯下降（P<0.05）。⑤免疫細(xì)胞化學(xué)染色法測定KCs中磷酸化P38MAPK結(jié)果：在12h和24h SAP組磷酸化P38MAPK的含量最高（0.46±0.07和0.52±0.04），SO組最低（0.15±0.03和0.18±0.05），兩者比較有顯著差異（P<0.01），但在Tau組磷酸化P38MAPK明顯降低（0.25±0.03和0.30±0.08），和SAP組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P