冠心病患者樹(shù)突狀細(xì)胞的功能及血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、背景： 心血管疾病是當(dāng)今危害人類健康的常見(jiàn)病，近年來(lái)人們對(duì)心血管疾病如動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)、冠心病(Coronaryheartdisease，CHD)等的實(shí)驗(yàn)和臨床研究不斷深入。盡管AS、CHD的發(fā)生發(fā)展與遺傳及生活方式有很大關(guān)系，但是其細(xì)胞和分子機(jī)制仍未明確。目前研究認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程不僅是脂質(zhì)在動(dòng)脈壁中的積聚，而且是一種慢性炎癥過(guò)程，更有學(xué)者認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化是一種與自身免疫機(jī)理有關(guān)的疾病。近

2、來(lái)研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞免疫和體液免疫在動(dòng)脈粥樣硬化形成中起重要作用，巨噬細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞以及樹(shù)突狀細(xì)胞(DendriticCell，DC)等免疫細(xì)胞均參與其中。DC是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)的專職性抗原提呈細(xì)胞(AntigenPresentatingCell，APC)，其抗原提呈作用是巨噬細(xì)胞的100余倍，被認(rèn)為是迄今為止唯一能激活初始型T淋巴細(xì)胞的APC，是機(jī)體免疫反應(yīng)的始動(dòng)者，在特異性細(xì)胞免疫和體液免疫中均起著十分重要的作用。

3、近年來(lái)DC的研究愈來(lái)愈受到關(guān)注，在疫苗的研制、腫瘤的免疫治療等與免疫相關(guān)的臨床應(yīng)用方面成為熱點(diǎn)。DC并非為一種或一類均一的細(xì)胞，它實(shí)際上代表了一個(gè)由數(shù)種表型和功能各異的細(xì)胞所組成的生物系統(tǒng)，它通過(guò)激活保護(hù)性免疫反應(yīng)和誘導(dǎo)中樞或外周的免疫耐受來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)外源性和自身抗原的免疫反應(yīng)。目前在主動(dòng)脈等大動(dòng)脈壁已檢測(cè)出DC的存在，并認(rèn)為DC是動(dòng)脈壁中的一種細(xì)胞成分，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)DC在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中聚集增多，此現(xiàn)象提示DC及其相關(guān)的免疫機(jī)制參

4、與了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展，抑制免疫炎癥反應(yīng)可能是抗AS、防治CHD的新途徑。臨床及實(shí)驗(yàn)證實(shí)，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)的應(yīng)用可通過(guò)改善冠狀動(dòng)脈灌注等作用部分逆轉(zhuǎn)AS或?qū)S起到預(yù)防作用。但其作用機(jī)制尚未完全明確，ACEI對(duì)免疫炎癥反應(yīng)的抑制可能是其中之一。目前ACEI對(duì)DC的影響國(guó)內(nèi)外少有報(bào)道。有研究認(rèn)為AngⅡ及其受體在DC中有高表達(dá)，AngⅡ可能介導(dǎo)了先天及獲得性免疫反應(yīng)的起始過(guò)程。在惡性高血壓模型中，AngⅡ通過(guò)DC激

5、活獲得性免疫從而加重了損傷，這種損傷與血壓升高無(wú)關(guān)。Muller等研究認(rèn)為AngⅡ促進(jìn)DC遷移，在其所致腎損傷中，抑制DC有保護(hù)作用。Danilov等研究發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞在向DC分化過(guò)程中，ACE的表達(dá)明顯提高，這可能不是單核細(xì)胞活化的一般過(guò)程，同時(shí)提示了ACE可能參與了DC抗原的提呈。因此ACEI可能影響DC所介導(dǎo)的免疫功能，并且通過(guò)抑制DC而發(fā)揮抗AS的作用，目前相關(guān)研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)應(yīng)用粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Granul

6、ocyte-macrophagecolonystimulatingfactor，GM-CSF)和白細(xì)胞介素-4(Interleukin-4，IL-4)聯(lián)合體外培養(yǎng)誘導(dǎo)CHD患者以及健康對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripherialbloodmononuclearcells，PBMC)發(fā)育為DC，并應(yīng)用倒置顯微鏡觀察其形態(tài)學(xué)變化、流式細(xì)胞儀(Flowcytometry，F(xiàn)CM)對(duì)細(xì)胞表面相關(guān)分化抗原和共刺激分子進(jìn)行測(cè)定、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(

7、Mixedlymphocytereaction，MLR)觀察其對(duì)同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的刺激能力，評(píng)價(jià)了CHD患者DC的功能狀態(tài)，并采用體外實(shí)驗(yàn)的方法評(píng)價(jià)了ACEI類代表藥物依那普利(Enalapril)對(duì)CHD患者DC功能的影響，以進(jìn)一步闡明DC這一重要的免疫細(xì)胞在CHD的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用，揭示ACEI對(duì)免疫功能的可能影響以及ACEI的抗AS、防治CHD的可能機(jī)制。 目的： 1、研究CHD患者DC的功能狀態(tài)，以闡明

8、免疫在CHD發(fā)病中的作用； 2、研究在體外ACEI對(duì)DC功能的影響，揭示ACEI對(duì)免疫功能的可能影響，并進(jìn)一步闡明ACEI抗AS、防治CHD的可能機(jī)制。 方法： 1、CHD患者及對(duì)照組各20例，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，在含粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)100ng/ml、白細(xì)胞介素4(IL-4)500u/ml條件下培養(yǎng)，收集培養(yǎng)第7天的懸浮細(xì)胞即DC進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。培養(yǎng)過(guò)程中以倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)

9、學(xué)變化。 2、CHD患者的PBMC設(shè)置4組：依那普利處理組(培養(yǎng)基中依那普利終濃度分別為1、10、100ng/ml)和未經(jīng)依那普利處理組。 3、流式細(xì)胞學(xué)(FCM)分析：收集DC細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC表面相關(guān)分化抗原CD1a、共刺激分子CD86的表達(dá)情況。 4、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)：以DC為刺激細(xì)胞，測(cè)定DC刺激同種異體T淋巴細(xì)胞增殖情況。 5、所有入選者均用免疫比濁法測(cè)定靜脈血C反應(yīng)蛋白(CR

10、P)濃度。 6、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所有資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS10.0軟件系統(tǒng)分析，P＜0.05為有顯著性差異。 結(jié)果： 1、外周血PBMC中的貼壁細(xì)胞在含粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、白細(xì)胞介素4(IL-4)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，3天后始出現(xiàn)樹(shù)突狀突起，培養(yǎng)7天后，培養(yǎng)細(xì)胞均勻分散在培養(yǎng)基中。各組外周血PBMC誘導(dǎo)的DC形態(tài)基本相同，DC相關(guān)分化抗原CD1a的表達(dá)率在90％以上。 2、

11、CHD患者與對(duì)照組DC表面均表達(dá)共刺激分子CD86，均可刺激T淋巴細(xì)胞強(qiáng)烈增殖，但CHD患者DC表面共刺激分子C86的表達(dá)增高，刺激T淋巴細(xì)胞增殖的能力增強(qiáng)，與對(duì)照組比較(81.65±6.65vs58.25±5.76，1.18±0.27vs0.67±0.13)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)；CHD患者DC表面共刺激分子CD86的表達(dá)率與血C反應(yīng)蛋白水平呈正相關(guān)(r=0.772，P=0.000)； 3、培養(yǎng)基中依那普利終濃度

12、分別為1、10、100ng/ml時(shí)，CHD患者DC表面共刺激分子CD86的表達(dá)明顯降低(分別為75.30±5.12、66.85±4.14、58.80±5.31)，對(duì)T淋巴細(xì)胞刺激的能力下降(A值分別為0.97±0.21、0.79±0.17、0.65±0.14)，與不加用依那普利組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論： 1、外周血PBMC中的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)7天后，CHD患者、CHD患者應(yīng)用依那普利后組與對(duì)照組外周血

13、PBMC在含粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素4(IL-4)條件下培養(yǎng)，均可成功誘導(dǎo)為DC，DC形態(tài)基本相同，均高表達(dá)DC相關(guān)分化抗原CD1a。 2、CHD患者與對(duì)照組DC表面均表達(dá)共刺激分子CD86，并且DC刺激T淋巴細(xì)胞強(qiáng)烈增殖，但CHD患者DC共刺激分子CD86的表達(dá)及刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力明顯高于對(duì)照組，并且CHD患者DC表面共刺激分子CD86的表達(dá)與C反應(yīng)蛋白水平呈正相關(guān)，說(shuō)明CHD患者DC處于激活狀態(tài)