鴿痘病毒分離株鑒定、致弱及免疫效力研究.pdf

1、鴿痘是由鴿痘病毒 (Pigeonpox virus，PPV) 引起的一種接觸性的常發(fā)傳染病。PPV為痘病毒科禽痘病毒屬，是體積最大的一類DNA病毒。鴿痘通常分為皮膚型和黏膜型兩種，前者以體表無羽毛部位出現(xiàn)散在的、結(jié)節(jié)狀的增生性皮膚病灶；后者以上呼吸道、口腔和食管部黏膜出現(xiàn)纖維素性壞死和增生性病灶。從南京市及周邊肉鴿飼養(yǎng)場疑似患鴿痘的皮膚中分離到兩株病毒，命名為NJ-18和ZJ。通過對其進行病毒分離、負染透射電鏡、包涵體檢查、理化特性、血

2、清特異性、4b核心蛋白序列和動物致病性各項指標測定。結(jié)果表明：電鏡下病毒粒子橢圓形，具有囊膜，大小240～330nm，表面呈桑椹樣，為典型痘病毒科病毒結(jié)構(gòu)特征；細胞漿中有包涵體，紅色、圓形或橢圓形；兩株病毒均對乙醚、氯仿、pH3.0、pH11.0均敏感、56℃30min病毒均喪失活力；血凝效價為1:16和1:32；NJ-18 EID<,50>為10<'-6.67>/0.2mL，ZJ EID<,50>為10<'-7.32>/0.2mL；鴿

3、痘血清對NJ-18和ZJ中和效價都為1:126，雞痘血清對NJ-18和ZJ中和效價分別為1:4和1:8；4b核心蛋白核苷酸序列同源性比較中，NJ-18 4b核心蛋白序列與ZJ同源性為93.4％，與India株同源性最高為99.6％，與CVL950株同源性最低為71.5％。NJ-18、ZJ 4b核心蛋白序列與已公開發(fā)表的其他禽痘病毒4b核心蛋白比較發(fā)現(xiàn)：NJ-18與FPV Diftosec CT 同源性最高為90.9％，與CPV V同源性

4、最低為66.8％。ZJ與FPV Diftosec CT同源性最高為909％，與CPVGB724-01-02同源性最低為66.9％。兩株病毒都能引起1月齡鴿全身性痘疹，雛雞致局部輕微痘疹，‘對金絲雀完全沒有致病性：攻毒用毒株zJ最小發(fā)痘量為50EID<,50>。以上結(jié)果綜合證明兩株病毒為鴿痘病毒。采用雞胚連續(xù)傳代方法，使PPVNJ-18分離株致弱，獲得了一株具有良好免疫原性、安全且純凈的鴿痘弱毒株，命名為PPVNJ-18F1-E1。結(jié)果表

5、明：PPVNJ-18經(jīng)過連傳16代，CAM出現(xiàn)水腫和痘斑典型的鴿痘病變，且對1月齡鴿喪失致病性，說明毒力減弱；在F16代的基礎(chǔ)上連續(xù)傳E16代，雞胚絨毛尿囊膜病變和EID<,50>均穩(wěn)定； E1、E5、E10和E1 6代病毒，經(jīng)鴿體傳5代，其毒力穩(wěn)定，不返強；E1、E5、E10和E16代病毒接種鴿后，均于接種部位出現(xiàn)輕微痘腫，為典型免疫接種反應(yīng)；對30、45、60日齡鴿保護率為100％；病毒純凈，無細菌和外源病毒污染。 利用PP