RGD-M6P對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的影響.pdf

1、目的:化學(xué)合成對(duì)氨基苯(N-精氨酰甘氨酰天冬氨酰)-6-磷酸-α-D-甘露糖苷,并探討RGD-M6P對(duì)原代肝星狀細(xì)胞活化、活化HSC分泌細(xì)胞外基質(zhì)的影響和對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)肝纖維化大鼠的保護(hù)作用.方法:利用化學(xué)方法合成精氨酰甘氨酰天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)、6-磷酸-對(duì)氨基苯-α-D-甘露糖苷,應(yīng)用EDC催化兩者共價(jià)結(jié)合成RGD-M6P,通過高效液相(HPLC)、質(zhì)譜等方法鑒定合成產(chǎn)物純度及分子量.應(yīng)用膠原酶原位灌注法分離原

2、代HSC,接種培養(yǎng)48小時(shí)后,隨機(jī)分成5組:①空白對(duì)照組:②轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1(transforming growth factor β 1,TGF β 1)組:只加TGFβ 1(終濃度5ng/ml);③M6P組:加入100μ g/ml(終濃度)M6P,同時(shí)加TGFβ 1(終濃度5ng/ml);④RGD組:加入100μ g/ml(終濃度)RGD,同時(shí)加TGFβ 1(終濃度5ng/ml);⑤RGD-M6P組:加入200 μ g/ml(終濃

3、度)RGD-M6P,同時(shí)加TGF β 1(終濃度5ng/ml).連續(xù)培養(yǎng)5天后,應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)上述5組HSC α-平滑肌激動(dòng)蛋白表達(dá)水平變化,應(yīng)用酶聯(lián)免疫(ELISA)檢測(cè)連續(xù)培養(yǎng)7天細(xì)胞上清液Ⅲ型前膠原(procollagen Ⅲ,PCⅢ)含量變化.結(jié)果:①合成RGD-M6P,純度達(dá)98.9％;②與TGF β 1組相比,RGD-M6P組原代HSC細(xì)胞培養(yǎng)上清液中PCⅢ含量顯著性降低(p<0.01);③與TGF β 1組相比,RG

4、D-M6P組原代HSC細(xì)胞α-SMA表達(dá)亦明顯減低(p<0.01);④與CCl4模型組相比,RGD-M6P組膠原面積比例顯著減小,肝纖維化病理改變明顯減輕(p<0.01);⑤與CCl4模型組相比,RGD-M6P組肝功能指標(biāo)明顯改善(p<0.01);⑥與CCl4模型組相比,RGD-M6P組血清PCHⅢ含量顯著性降低(p<0.01).結(jié)論:①成功合成RGD-M6P;②RGD-M6P顯著減少原代HSC α-SMA的表達(dá)水平,明顯降低培養(yǎng)上清中