痹愈湯對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎骨侵蝕治療機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以慢性、對(duì)稱性多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病。本病呈全球性分布，在我國的患病率為0.32％-0.36％，低于歐美國家白種人的1％，是造成我國人群勞動(dòng)力喪失和致殘的主要病因之一。RA的主要病理變化為關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥，炎性細(xì)胞浸潤，滑膜血管翳形成，血管翳向鄰近軟骨和骨組織侵蝕，導(dǎo)致骨質(zhì)破壞，關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。 有關(guān)RA骨侵蝕的機(jī)制及其細(xì)胞和分子基礎(chǔ)成為

2、近年來研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)之一。細(xì)胞外基質(zhì)的降解是造成RA關(guān)節(jié)軟骨、骨侵蝕的主要因素。而基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)和金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)兩種酶系統(tǒng)在此過程中的作用尤為重要。此外，多種炎性細(xì)胞因子亦參與了這一過程。如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、血小板源性生長因子(PDGF)等。它們破壞了RA骨質(zhì)代謝中的動(dòng)態(tài)平衡系統(tǒng)，作用于軟骨基質(zhì)的降解過程，導(dǎo)致了RA的骨質(zhì)破壞。 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎屬于中醫(yī)“痹癥

3、”范疇。而RA骨侵蝕又可歸屬于“骨痹”、“歷節(jié)”、“白虎歷節(jié)”、“頑痹”、“鶴膝風(fēng)”等范疇。中醫(yī)認(rèn)為，病久肝腎虧虛，筋脈失養(yǎng)，骨損筋攣，外邪內(nèi)侵，同久痰濁、瘀血交阻于骨骱，凝聚不散，以致關(guān)節(jié)變形，出現(xiàn)骨侵蝕?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)，補(bǔ)益肝腎、活血化瘀中藥能抑制血管增生、血管翳的形成，促進(jìn)成骨細(xì)胞成熟、抑制軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的降解，因而減輕RA骨侵蝕。中藥痹愈湯是我國著名老中醫(yī)胡蔭奇主任醫(yī)師治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎30余年的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，由骨碎補(bǔ)、土貝母、

4、徐長卿、伸筋草、莪術(shù)組成，具有補(bǔ)腎強(qiáng)骨、活血化瘀、祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛之功能。 膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)模型在免疫病理、臨床表現(xiàn)、組織病理變化等方面與人RA最為接近，是目前國際公認(rèn)的研究RA發(fā)病機(jī)理、治療藥物的理想動(dòng)物模型。我們以前的實(shí)驗(yàn)已證實(shí)痹愈湯可以上調(diào)CIA大鼠骨保護(hù)素(OPG)的水平，下降RANKL水平，從而抑制破骨細(xì)胞的分化和活化，提高破骨細(xì)胞的凋亡，抑制骨吸收，減輕關(guān)節(jié)骨破壞。 目的：本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步闡明中藥痹

5、愈湯治療RA骨侵蝕的機(jī)制，采用CIA大鼠模型，經(jīng)中藥痹愈湯高、中劑量組及西藥甲氨喋呤組進(jìn)行對(duì)照治療，HE染色觀察其對(duì)CIA大鼠踝關(guān)節(jié)病理結(jié)構(gòu)改變的影響，免疫組化法檢測(cè)關(guān)節(jié)軟骨MMP-3、TIMP-1、PDGF-A水平的表達(dá)，Masson染色觀察關(guān)節(jié)軟骨膠原纖維光密度的差異，旨在探討中藥痹愈湯治療RA骨侵蝕可能的作用機(jī)制。方法：(1)選取50只SD雄性大鼠，隨機(jī)分為五組：正常組、模型組、甲氨喋呤組、痹愈湯中劑量組和痹愈湯高劑量組。每組各1

6、0只。除正常組外，每組大鼠雙足跖部注射含Ⅱ型膠原的弗氏完全佐劑制作膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型。(2)在造模后1周，除模型組外，各用藥組分別連續(xù)給藥5周，在造模及用藥前后觀察大鼠的一般情況，并記錄體重；用游標(biāo)卡尺測(cè)量右足跖部厚度，觀察藥物對(duì)CIA大鼠一般情況的影響。(3)摘取右側(cè)踝關(guān)節(jié)進(jìn)行固定、脫鈣、石蠟包埋，HE染色，光鏡下觀察關(guān)節(jié)病理變化。(4)免疫組化檢測(cè)關(guān)節(jié)軟骨的MMP-3、TIMP-1及PDGF-A的表達(dá)，并采用計(jì)算機(jī)圖像分析的方法對(duì)其

7、表達(dá)量進(jìn)行定量分析。(5)Masson染色觀察關(guān)節(jié)軟骨膠原纖維光密度的差異，并采用計(jì)算機(jī)圖像儀對(duì)其表達(dá)量進(jìn)行分析。(6)應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)論：通過對(duì)痹愈湯治療CIA大鼠實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：痹愈湯治療CIA大鼠療效明顯，其作用機(jī)理與下列因素有關(guān)：抑制關(guān)節(jié)軟骨中MMP-3的表達(dá)，減輕軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的降解；增加TIMP-1的表達(dá)，調(diào)整MMP3H/TMP1的失衡，減輕CIA大鼠骨侵蝕，抑制關(guān)節(jié)軟骨PDGF-A的表達(dá)