樂果對(duì)大鼠中樞抑制性氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的影響.pdf

1、有機(jī)磷農(nóng)藥的毒作用機(jī)理主要是抑制乙酰膽堿酯酶活性，使乙酰膽堿過度蓄積而引起一系列中毒癥狀。阿托品和膽堿酯酶復(fù)能劑的應(yīng)用有力地證明了這點(diǎn)，但兩者對(duì)重度中毒所引起的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的療效并不完全，提示有機(jī)磷農(nóng)藥引起的神經(jīng)系統(tǒng)中毒可能與非膽堿能機(jī)制有關(guān)。中樞抑制性氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)在抽搐發(fā)作、學(xué)習(xí)記憶等方面具有非常重要的作用，而且許多腦區(qū)內(nèi)膽堿能體系和γ-氨基丁酸(GABA)體系存在交互作用。因此，在有機(jī)磷農(nóng)藥中毒模型中觀察抑制性氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的

2、變化并初步探討其可能機(jī)制，對(duì)闡明有機(jī)磷中毒的非膽堿能毒作用機(jī)制意義重大。 本課題研究了有機(jī)磷農(nóng)藥樂果急性、亞慢性染毒對(duì)大鼠中樞GABA系統(tǒng)的影響。并通過正交實(shí)驗(yàn)觀察增加中樞GABA含量(給予GABA轉(zhuǎn)氨酶抑制劑——氨基烯酸)對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥急性中毒的保護(hù)效果。 SD大鼠單次經(jīng)口灌胃給予樂果，劑量分別為0(NS)，低劑量組(38.9 mg/kg)，中劑量組(83.7mg/kg)和高劑量組(180.0g/kg)，分別在染毒后第0

3、.5、2、8、24h斷頭處死，用高效液相色譜法(high-performance liquid chromatography，HPLC)法測(cè)定大鼠大腦皮質(zhì)、海馬兩個(gè)腦區(qū)中抑制性氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)GABA、甘氨酸(Glycine，Gly)含量。海馬各劑量組GABA及Gly的含量與對(duì)照組(GABA:0.955±0.099μmol/g蛋白；Gly：0.849±0.216μmol/g蛋白)相比，都有不同程度增加，其中海馬低劑量組各時(shí)間段，中劑量組0

4、.5、2、8h，高劑量組0.5、24h GABA含量的增加與對(duì)照組相比都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Gly低劑量組在染毒8h,中劑量組0.5h,高劑量組0.5、24h的含量均升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大腦皮質(zhì)GABA及Gly含量與對(duì)照組(GABA:0.967±0.053μmol/g蛋白；Gly:0.840±0.213μmol/g蛋白)相比，均有所增加，但差異都沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。急性樂果染毒8h后，用放射性配體受體結(jié)合法(radioligand rece

5、ptor binding assay，RBA)測(cè)定大鼠大腦皮質(zhì)GABA<,A>受體的最大結(jié)合容量(Maximum binding capacity,Bmax)和平衡解離常數(shù)(Equilibrium dissociation constant，Kd)，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比(Bmax=6.11±0.23pmol/mg，Kd=97.5±5.9 nmol/L)，各劑量組GABA<,A>受體的Bmax值的改變沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而Kd值降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6、采用正交實(shí)驗(yàn)，觀察能增加中樞GABA濃度的氨己烯酸(Vigabatrin，VGB)對(duì)樂果中毒的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)其與阿托品連用可改善樂果中毒小鼠的癥狀，延長(zhǎng)中毒小鼠的存活時(shí)間，并與阿托品有一定的協(xié)同治療作用。這些結(jié)果提示，樂果中毒后抑制性氨基酸遞質(zhì)變化的復(fù)雜性，不同劑量、不同時(shí)程表現(xiàn)可能完全不同，反映了有機(jī)體功能的整體性和一定程度上的代償性。在大鼠90d實(shí)驗(yàn)中，大鼠灌胃給予樂果，劑量分別為0(NS)，低劑量(5.0mg/kg)，中劑量(10

7、.0mg/kg)和高劑量組(20.0mg/kg)，每周染毒5天(次)，實(shí)驗(yàn)周期90d。實(shí)驗(yàn)期間，各染毒組動(dòng)物全血AChE活性明顯抑制，實(shí)驗(yàn)后期有所恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，低、中、高染毒組延髓AChE活性分別約為對(duì)照組的78％、63％、42％。與對(duì)照組(0.979±0.143 umol/g蛋白；0.845±0.220 umol/gprotein)相比，中、高劑量組大腦皮質(zhì)GABA、Gly含量明顯降低(P<0.01)；而海馬GABA、Gly含量明

8、顯升高(P<0.01)。大腦皮質(zhì)GABA<,A>受體的Bmax值低劑量組升高(P<0.05)，中劑量組降低(P<0.05)，各劑量組GABA<,A>受體的Kd值比對(duì)照組均有降低，且低、中劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 本課題以樂果為有機(jī)磷農(nóng)藥代表，研究了樂果急性和亞慢性染毒對(duì)大鼠中樞GABA系統(tǒng)的影響，為理解有機(jī)磷農(nóng)藥中毒的非膽堿能毒作用機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，闡明了接觸有機(jī)磷農(nóng)藥引起的中樞GABA遞質(zhì)通路的改變，認(rèn)為抑制