抵抗素基因-420C-G多態(tài)性與非酒精性脂肪肝炎的研究.pdf

1、目的：研究抵抗素(Resistin)基因啟動(dòng)區(qū)-420C/G多態(tài)性與日本高知地區(qū)非酒精性脂肪肝炎(Nonalcoholicsteatohepatitis，NASH)的相關(guān)性。 方法：提取日本高知地區(qū)77位NASH患者(男38人，女39人；年齡44±16)和107位正常者(男53人，女54人；年齡42±17)外周靜脈血白細(xì)胞，用常規(guī)法制備DNA。應(yīng)用聚合酶聯(lián)反應(yīng)-限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)擴(kuò)增包括Resistin基因

2、啟動(dòng)區(qū)第-420位點(diǎn)等位基因在內(nèi)的219bp長(zhǎng)度片斷，應(yīng)用限制性內(nèi)切酶BpiⅠ對(duì)PCR擴(kuò)增的目的基因進(jìn)行酶切，測(cè)定Resistin基因5'啟動(dòng)區(qū)-420C/G多態(tài)性。NASH患者空腹12小時(shí)后，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法測(cè)定血漿resistin水平，同時(shí)測(cè)定血清白蛋白、血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)值，及空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)、糖化血紅蛋白HbA1C、脫水山梨糖醇1

3、.5-AG濃度。測(cè)量身高、體重、腰圍及血壓，并計(jì)算出體重指數(shù)(BMI)；以75g無(wú)水葡萄糖口服行OGTT試驗(yàn)，并計(jì)算口服葡萄糖刺激后胰島素曲線下面積，及第30min胰島素濃度(Ⅰ30)和血糖濃度(G30)的比值(Ⅰ30/G30，Insulinogenicindex)；采用穩(wěn)態(tài)模式評(píng)估法(HOMA公式)評(píng)價(jià)HOMA-IR胰島素抵抗指數(shù)，HOMA-β胰島素分泌指數(shù)。對(duì)NASH患者均進(jìn)行肝穿刺活組織檢查，按照BRUNT的診斷標(biāo)準(zhǔn)，確定肝臟病理

4、分期；肝臟脂肪浸潤(rùn)面積由NIH圖像軟件計(jì)算得出；對(duì)肝臟脾臟使用螺旋CT掃描，計(jì)算出L/S值，用于肝臟脂肪沉積的半定量評(píng)價(jià)；采用FatScan掃描系統(tǒng)于平臍部位測(cè)定內(nèi)臟脂肪(VF)和皮下脂肪(SF)含量。并對(duì)以上數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析和逐步回歸分析。 結(jié)果：77例病人和107例正常者均可檢測(cè)到預(yù)計(jì)的219bp片斷，且均符合Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)及卡方Chi-square檢驗(yàn)(P＞0.05)。限制性內(nèi)切酶BpiⅠ(BbvⅡ)

5、對(duì)Resistin基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物酶切后存在三種基因型：GG、GC、CC。NASH患者組的G等位基因頻率與正常對(duì)照組(NC)比較，差異有顯著性(P＜0.01)；NASH患者組的GG基因型頻率要顯著高于正常對(duì)照組(36.3﹪vs18.7﹪，p＜0.01)。NASH患者組中GG基因型攜帶者的resistin血液含量顯著高于其他基因型攜帶者(P＜0.001)；且GG基因型NASH患者合并IGT和DM患者的數(shù)量要多于其他兩組(P＜0.05，O

6、R=3.80，95﹪可信區(qū)間：1.14-12.67)，同時(shí)肝臟纖維化發(fā)展程度更迅速(P＜0.02)。CC基因型組OGTT胰島素AUC要明顯大于其他兩組(2279±1547pmol*h/Lvs.1350±776pmol*h/L，p＜0.01)；早期胰島素分泌反應(yīng)Insulinogenicindex要顯著高于其他兩組(1.94±1.78vs.0.65±0.59，p＜0.02)。GG基因組的HOMA-IR及BMI與其他兩組基因型相比較并無(wú)顯著