雌激素及雌激素受體β對(duì)大腸癌發(fā)生及生物學(xué)行為的影響.pdf

1、流行病學(xué)調(diào)查顯示，絕經(jīng)后婦女發(fā)生散發(fā)性大腸癌的風(fēng)險(xiǎn)較絕經(jīng)前婦女明顯增加，而采取以雌激素為主的激素替代治療可以顯著降低發(fā)生大腸癌的風(fēng)險(xiǎn)和改善預(yù)后。雌激素是通過雌激素受體介導(dǎo)產(chǎn)生效應(yīng)的。目前發(fā)現(xiàn)雌激素受體存在兩種亞型，Erα和Erβ。雌激素受體的兩種亞型的生物學(xué)效應(yīng)不完全相同。不同組織中Erα和Erβ的相對(duì)表達(dá)量存在差異。在正常大腸粘膜中，雌激素受體的表達(dá)以Erβ為主，Erα的表達(dá)極低。多項(xiàng)臨床研究顯示，Erβ在大腸癌中的表達(dá)明顯減少。在乳

2、腺癌、前列腺癌等腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，Erβ能夠抑制腫瘤的生長(zhǎng)以及侵襲。這些發(fā)現(xiàn)提示，雌激素和Erβ具有預(yù)防和抑制大腸癌的發(fā)生發(fā)展的作用。那么雌激素和雌激素受體β
　　 究竟如何并通過何種機(jī)制影響大腸癌的發(fā)生和生物學(xué)行為呢？本文從體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)研究雌激素和雌激素受體β對(duì)大腸癌的影響，并探討其機(jī)制。
　　 第一部分：卵巢切除對(duì)二甲肼誘導(dǎo)的大腸腫瘤形成及微衛(wèi)星不穩(wěn)定的影響
　　 目的：觀察卵巢切除對(duì)二甲肼誘導(dǎo)的大鼠大腸腫

3、瘤形成和微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)的影響，探討MSI在女性絕經(jīng)后散發(fā)性大腸癌發(fā)生中的作用。
　　 方法：40只雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組（Sham組）和卵巢切除組（OVX組），用誘導(dǎo)劑二甲肼（DMH）進(jìn)行腹腔內(nèi)注射20 次（1 次/周,20mg/kg體重）,給藥結(jié)束后10 周時(shí)處死所有大鼠收集腫瘤。用熒光標(biāo)記PCR擴(kuò)增腫瘤基因組的6個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，應(yīng)用全自動(dòng)DNA測(cè)序分析儀檢測(cè)MSI的發(fā)生。
　　 結(jié)果：OVX組

4、平均腫瘤數(shù)明顯高于Sham組(3.6±1.4 vs 2.4±1.6，P<0.05)。OVX組中MSI陽性腫瘤的所占比例明顯高于Sham組(32.1% vs 10.8%，P<0.05)。OVX組中多位點(diǎn)出現(xiàn)MSI的腫瘤所占比例亦高于Sham組(18.9% vs 2.7%，P<0.05)。
　　 結(jié)論：卵巢切除促進(jìn)了DMH誘導(dǎo)的大鼠大腸腫瘤形成并增加了MSI的發(fā)生率。微衛(wèi)星不穩(wěn)定途徑可能在絕經(jīng)后大腸癌的發(fā)生中起重要作用。
　　

5、 第二部分：雌激素及雌激素受體β對(duì)大腸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響
　　 目的：觀察雌激素以及雌激素受體β（Erβ）過表達(dá)對(duì)大腸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響，并探討其機(jī)制。
　　 方法：以脂質(zhì)體介導(dǎo)的Erβ基因轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞，G418篩選陽性克隆(SW480-C1-Erβ)。RT-PCR及Western印跡法鑒定Erβ的過表達(dá)。以正常SW480細(xì)胞和轉(zhuǎn)染了空質(zhì)粒的SW480細(xì)胞(SW480-pEGFP-C1)作為對(duì)照，在無雌激

6、素或者有雌激素作用的條件下，用四甲基偶氮唑藍(lán)比色法（MTT法）檢測(cè)細(xì)胞增殖，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，通過實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因survivin和Bax mRNA的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：SW480和SW480-pEGFP-C1細(xì)胞中ErβmRNA和蛋白的表達(dá)較低，而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SW480-C1-Erβ細(xì)胞中ErβmRNA和蛋白的表達(dá)明顯增加。無論是在無雌激素還是有雌激素作用的條件下均可發(fā)現(xiàn)：SW480-

7、C1-Erβ細(xì)胞的增殖速度和凋亡率分別明顯慢于和高于SW480細(xì)胞（或SW480-pEGFP-C1細(xì)胞)，SW480-C1-Erβ細(xì)胞中survivin mRNA和Bax mRNA的表達(dá)分別明顯低于或高于SW480細(xì)胞（或SW480-pEGFP-C1細(xì)胞）。在SW480-C1-Erβ細(xì)胞中，雌激素作用時(shí)細(xì)胞的增殖速度和凋亡率分別明顯低于和高于無雌激素作用的細(xì)胞，而且雌激素作用時(shí)細(xì)胞的survivin和Bax mRNA的表達(dá)分別明顯低于和

8、高于無雌激素作用的細(xì)胞。而在SW480細(xì)胞（或SW480-pEGFP-C1細(xì)胞）中，雌激素作用組細(xì)胞的增殖、凋亡率以及survivin和Bax mRNA的表達(dá)與無雌激素作用組相比較無明顯差異。
　　 結(jié)論：Erβ過表達(dá)可以同時(shí)以呈配體非依賴性和配體依賴性的方式抑制細(xì)胞增殖和增加細(xì)胞凋亡，可能與調(diào)控凋亡相關(guān)基因survivin和Bax的表達(dá)有關(guān)。
　　 第三部分：雌激素及雌激素受體β對(duì)大腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響
　　

9、 目的：觀察雌激素以及雌激素受體β過表達(dá)對(duì)大腸癌細(xì)胞侵襲能力的影響，研究其對(duì)侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因E-鈣粘蛋白和CXCR4的影響。
　　 方法：在無雌激素或者有雌激素作用的條件下，利用Transwell小室法測(cè)定SW480細(xì)胞、SW480-pEGFP-C1細(xì)胞和SW480-C1-Erβ細(xì)胞的侵襲能力；采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法和Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞中E-鈣粘蛋白和CXCR4基因的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　

10、 結(jié)果：在無雌激素作用的條件下，SW480-C1-Erβ細(xì)胞的侵襲能力和CXCR4的表達(dá)低于SW480細(xì)胞（或SW480-pEGFP-C1細(xì)胞)。在雌激素作用的條件下，SW480-C1-Erβ細(xì)胞的侵襲能力和E-鈣粘蛋白的表達(dá)分別低于和高于SW480細(xì)胞（或SW480-pEGFP-C1細(xì)胞)。在SW480-C1-Erβ細(xì)胞中，雌激素作用時(shí)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力和E-cadherin的表達(dá)分別明顯低于和高于無雌激素作用的細(xì)胞，而CXCR4的表