CBP通過調(diào)節(jié)組蛋白乙?；絽⑴c神經(jīng)病理性疼痛機(jī)制的研究.pdf

1、目的
　　構(gòu)建SD大鼠坐骨神經(jīng)慢性縮窄性損傷(CCI)模型,觀察大鼠疼痛行為學(xué)及組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶CBP表達(dá)變化趨勢(shì)。鞘內(nèi)注射CBPshRNA觀察脊髓水平抑制CBP對(duì)大鼠神經(jīng)病理性疼痛以及對(duì)組蛋白乙?；健OX-2表達(dá)的影響,研究CBP神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病的具體機(jī)制。
　　方法
　　1.成年雄性SD大鼠30只,隨機(jī)分為3組:正常組(n=5)、Sham組(n=5)和CCI組(n=20)。CCI組建立左側(cè)CCI模型,Sha

2、m組僅暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)而不結(jié)扎,術(shù)前1天及術(shù)后1、3、5、7、10、12、14、21天測(cè)定左后足機(jī)械痛閾和熱痛閾,術(shù)后3、7、14、21天分批灌注處死,取腰段脊髓免疫組化方法觀察組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶CBP的表達(dá)變化。
　　2.成年雄性SD大鼠40只,鞘內(nèi)置管成功5天后建立左側(cè)CCI模型,隨機(jī)分為4組(n=10):Sham+NS組、CCI+NS組、CCI+NC組、CCI+CBP shRNA組。CCI術(shù)后7天鞘內(nèi)分別注射生理鹽水、陰性對(duì)照

3、病毒載體(RNAi-NC-LV)、CBP shRNA病毒載體(CBPRNAi-LV)各20μ1。術(shù)前1天、術(shù)后3、5、7、10、12、14天測(cè)定大鼠左后足機(jī)械痛閾和熱痛閾。于CCI術(shù)后14天取腰段脊髓,免疫組化法檢測(cè)CBP、Ac-H3、Ac-H4、COX-2形態(tài)學(xué)表達(dá)的變化,RT-PCR檢測(cè)CBP、COX-2 mRNA水平的變化,western blot檢測(cè)COX-2蛋白水平的變化。
　　結(jié)果
　　1.與Sham組相比,CC

4、I組大鼠術(shù)側(cè)后足機(jī)械痛閾和熱痛閾明顯下降,在術(shù)后第7天最明顯,持續(xù)至第21天(P＜0.05)。腰段脊髓免疫組化結(jié)果表明CBP陽(yáng)性細(xì)胞以灰質(zhì)表達(dá)為主,灰質(zhì)全層均有表達(dá),脊髓背角Ⅰ～Ⅲ層高表達(dá),陽(yáng)性顆粒主要位于胞核,胞漿少量存在。CCI組腰段脊髓背角淺層的CBP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)從術(shù)后第3天開始明顯增多,第14天達(dá)到高峰,并持續(xù)至第21天(P＜0.05)。
　　2.CCI大鼠左后足機(jī)械痛閾和熱痛閾在各測(cè)量時(shí)間點(diǎn)均明顯降低,與Sham組相比差異

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);鞘內(nèi)注射CBPRNAi-LV可明顯緩解大鼠左后足機(jī)械痛閾和熱痛閾的降低(P＜0.05),其作用可持續(xù)至注射后第7天,而鞘內(nèi)注射RNAi-NC-LV后,大鼠機(jī)械痛閾和熱痛閾無明顯變化(P＞0.05)。CCI大鼠腰段脊髓CBP、Ac-H3、Ac-H4、COX-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)以及CBP mRNA、COX-2 mRNA、COX-2蛋白均明顯升高(P＜0.05),鞘內(nèi)注射CBPRNAi-LV可明顯抑制上述蛋白和mRNA

6、的表達(dá)增加,而鞘內(nèi)注射RNAi-NC-LV則無明顯作用(P＞0.05)。
　　結(jié)論
　　1.神經(jīng)病理性疼痛大鼠出現(xiàn)明顯隨時(shí)間變化的疼痛行為,腰段脊髓背角CBP陽(yáng)性細(xì)胞在術(shù)后表達(dá)變化與疼痛行為學(xué)變化基本一致;
　　2.CCI術(shù)后7天鞘內(nèi)注射CBP shRNA可以提高其機(jī)械痛閾和熱痛閾,緩解疼痛;
　　3.CBP、Ac-H3、Ac-H4、COX-2在CCI術(shù)后14天表達(dá)增加,鞘內(nèi)注射CBP shRNA能顯著干擾CBP