B7-H1在腦膠質(zhì)瘤中對(duì)Treg細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、腫瘤是當(dāng)今社會(huì)嚴(yán)重威脅人類健康的最主要疾病之一,尋找治療腫瘤的有效方法是醫(yī)學(xué)工作者的一個(gè)非常重要的課題。由于腫瘤組織存在主動(dòng)的免疫逃逸機(jī)制,因此目前的多種免疫治療方法效果并不明顯。腫瘤細(xì)胞針對(duì)機(jī)體的抗腫瘤免疫,采取多種方法逃避免疫清除,其中PD-L1(B7-H1)/PD-1信號(hào)系統(tǒng)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是腫瘤逃避免疫清除最為重要的兩種途徑。B7-H1在多種腫瘤細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞表面高表達(dá);而腫瘤浸潤(rùn)的T淋巴細(xì)胞中Treg細(xì)胞的比例也異常升高。B7

2、-H1與PD-1結(jié)合,產(chǎn)生免疫抑制性信號(hào);而Treg細(xì)胞則通過(guò)直接或間接的免疫抑制作用,降低腫瘤特異性T淋巴細(xì)胞的活性,幫助腫瘤逃避免疫清除。最新的研究發(fā)現(xiàn),B7-H1分子是誘導(dǎo)型調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞發(fā)育和功能維持的重要分子,單獨(dú)的B7-H1信號(hào)即可以將初始CD4+CD25-T細(xì)胞轉(zhuǎn)化成Treg細(xì)胞,發(fā)揮免疫抑制作用。但在腫瘤免疫逃逸過(guò)程中,B7-H1發(fā)揮免疫抑制作用是否通過(guò),或多大程度上通過(guò)誘導(dǎo)Treg細(xì)胞而實(shí)現(xiàn)的,目前尚沒(méi)有答案。本課題

3、擬通過(guò)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系與na?veT細(xì)胞的共培養(yǎng),研究腫瘤細(xì)胞表達(dá)的B7-H1是如何通過(guò)調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)腫瘤的免疫逃逸;并通過(guò)干預(yù)腫瘤B7-H1的表達(dá),建立抑制腫瘤免疫逃逸的新思路。該研究結(jié)果可以深入了解腫瘤的免疫逃逸機(jī)理,從而尋找到克服腫瘤免疫逃逸的方法,提出新的腫瘤治療策略,對(duì)提高腫瘤免疫清除和治愈腫瘤具有非常重要的理論和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
　　目的:
　　闡明腫瘤細(xì)胞表達(dá)B7-H1分子發(fā)揮免疫抑制作用與誘導(dǎo)Treg細(xì)胞產(chǎn)

4、生的關(guān)系,從而進(jìn)一步闡明B7-H1分子的腫瘤免疫抑制機(jī)理,探索干涉腫瘤細(xì)胞B7-H1分子對(duì)抑制腫瘤免疫逃逸的作用。
　　方法:
　　1.分別利用免疫組織化學(xué)法和免疫熒光法檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤臨床標(biāo)本中的B7-H1分子的表達(dá)情況及Treg細(xì)胞在腫瘤中的浸潤(rùn)。
　　2.用流式細(xì)胞儀檢測(cè)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中B7-H1分子的表達(dá),并挑選出高表達(dá)B7-H1分子的細(xì)胞株。
　　3.構(gòu)建含針對(duì)B7-H1分子的shRNA慢病毒表達(dá)載體,感染

5、高表達(dá)B7-H1分子的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株,利用westernblot和qRT-PCR檢測(cè)其干涉效果。
　　4.在正常人靜脈血中分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),然后利用免疫磁珠法分選出naveT細(xì)胞,并檢測(cè)分選純度。
　　5.用CD3和CD28抗體刺激na?veT細(xì)胞,使其活化。
　　6.把干涉B7-H1分子表達(dá)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞和正常表達(dá)B7-H1分子的膠質(zhì)瘤細(xì)胞分別與從人血中分離出的naveT細(xì)胞共培養(yǎng),然后用Treg細(xì)胞檢

6、測(cè)試劑盒檢測(cè)na?veT細(xì)胞向Treg細(xì)胞分化的程度。
　　結(jié)果:
　　1.我們?nèi)〉?0例膠質(zhì)瘤標(biāo)本(未分級(jí)),用免疫組化染色觀察到了B7-H1分子在7例中都有表達(dá)。并且3例Treg細(xì)胞浸潤(rùn)較多的組織其B7-H1分子的表達(dá)也呈陽(yáng)性。
　　2.我們運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)了5株人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中B7-H1的表達(dá),發(fā)現(xiàn)在其中三株都有較高表達(dá)。并選取U251細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。
　　3.分選出的na?veT細(xì)胞,經(jīng)過(guò)CD3和C

7、D28抗體的共刺激,觀察到T淋巴細(xì)胞的增殖,說(shuō)明na?veT細(xì)胞得到成功活化。
　　4.TGF-β在誘導(dǎo)分化Treg細(xì)胞的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。
　　5.B7-H1可以協(xié)同TGF-β促使naiveT細(xì)胞向Treg細(xì)胞方向分化。
　　主要結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)在細(xì)胞水平證實(shí)了B7-H1分子能夠促進(jìn)naveT細(xì)胞向Treg細(xì)胞方向的分化,而Treg細(xì)胞負(fù)向調(diào)控所有適應(yīng)性免疫,對(duì)于腫瘤的免疫逃逸具有重要的貢獻(xiàn)作用。腫瘤組