獨(dú)活揮發(fā)油對(duì)N-脂肪?；掖及匪饷傅囊种谱饔靡约翱寡鬃饔玫难芯?pdf

1、目的：研究獨(dú)活（Radix Angelicae Pubescentis，RAP）揮發(fā)油對(duì)內(nèi)源性大麻素水解酶N-脂肪?；掖及匪饷?N-Acylethanolamine-hydrolyzing AcidAmidase，NAAA)、脂肪酰胺水解酶（Fatty Acid Amide Hydrolase，F(xiàn)AAH）、單酰基甘油酯酶(Monoacylglycerol Lipase，MGL)水解活性的影響以及對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞R

2、AW264.7炎癥反應(yīng)模型的抗炎作用以及可能機(jī)制的探討。
　　 方法：采用水蒸氣蒸餾法提取獨(dú)活揮發(fā)油，GC/MS檢測(cè)化學(xué)成分；采用NAAA、FAAH、MGL過表達(dá)細(xì)胞蛋白和LC/MS檢測(cè)內(nèi)源性大麻素水解酶NAAA、FAAH、MGL的水解活性；采用LPS誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7建立細(xì)胞炎癥反應(yīng)模型；采用LC/MS檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)N-棕櫚酸乙醇胺(N-Palmitoylethanolamine，PEA)水平；采用實(shí)時(shí)定量PCR(R

3、ealTime-PCR)檢測(cè)腫瘤壞子因子-α(TNF-α)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)mRNA表達(dá)：采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)TNF-α含量；采用Griess法檢測(cè)一氧化氮(NO)含量。
　　 結(jié)果：獨(dú)活揮發(fā)油可有效抑制NAAA水解活性，對(duì)FAAH只有在高劑量下有一定的抑制作用，對(duì)MGL沒有抑制作用；GC/MS鑒定出獨(dú)活揮發(fā)油的主要化學(xué)成分，包括蛇床子素(Osthole)、1，2-二氮-

4、1-雜萘硫醇(1，2-Dihydro-1-thioxophthalazine)、α-紅沒藥醇(α-Bisabolol)、4-羥基-2-甲基苯乙酮(4-Hydroxy-2-methylacetophenone)等20個(gè)化合物；在LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)模型中，獨(dú)活揮發(fā)油能夠逆轉(zhuǎn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，呈現(xiàn)出PEA升高和炎癥因子表達(dá)降低：細(xì)胞內(nèi)PEA水平上升，炎癥因子TNF-α、IL-6以及iNOSmRNA表達(dá)、TNF-α和NO釋放