神經(jīng)營養(yǎng)素3基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在面神經(jīng)損傷治療的初步研究.pdf

1、安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文神經(jīng)營養(yǎng)素3基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在面神經(jīng)損傷治療的初步研究姓名：陳傳好申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：韓卉趙莉20040401安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文神經(jīng)營養(yǎng)素3基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在面神經(jīng)損傷治療的初步研究研究生：陳傳好導(dǎo)師：韓卉教授趙莉教授安徽醫(yī)科大學(xué)人體解剖學(xué)教研室合肥230032中文摘要目的：重組神經(jīng)營養(yǎng)素3基因，在面神經(jīng)損傷模型作肌肉真核表達(dá)，為治療神經(jīng)損傷打下科研基礎(chǔ)。方

2、法：利用蛋白酶K裂解法從外周血中獲取健康人基因組DNA，采用PCR方法從中擴(kuò)增出編碼神經(jīng)營養(yǎng)素3全長基因，然后與線形克隆載體pMDl8T連接，并將其亞克隆至真核表達(dá)載體pcDNA31()：大量制備并純化重組質(zhì)粒pcDNA31()NT。3；離斷大鼠兩側(cè)面神經(jīng)的下頜緣支和頰支的主干，制備面神經(jīng)損傷模型。用微量注射器將DCChol和pcDNA31()NT3混合物直接注射到大鼠的右側(cè)(實(shí)驗(yàn)側(cè))面神經(jīng)切斷處神經(jīng)所支配的肌肉內(nèi)，左側(cè)(對照側(cè))只注射

3、DCChol和pcDNA31()混合物。在轉(zhuǎn)基因后，觀察大鼠觸須拂動恢復(fù)情況。第7天，采用RT—PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因處肌肉的NT。3基因表達(dá)。結(jié)果：PCR擴(kuò)增出一約780bp的DNA片段；將重組質(zhì)粒pMDl8一NT一3、DcDNA31()Nq‘3分別作Hf州III和肋DRI雙酶切，都能得到一個(gè)大小與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物一致的插入片段：測序結(jié)果表明：NT一3基因與Genbank中基因序列高度符合，同時(shí)表示M一3基因的克隆和亞克隆均成功；經(jīng)脂質(zhì)體