建立人源化NOD-SCID小鼠EB病毒相關(guān)噬血細胞綜合征模型與兒童噬血細胞綜合征預后因素分析.pdf

1、第一部分建立人源化NOD/SCID小鼠EB病毒相關(guān)噬血細胞綜合征模型
　　目的：建立人源化NOD/SCID小鼠EB病毒相關(guān)噬血細胞綜合征疾病模型，分析噬血細胞綜合征的預后相關(guān)危險因素。
　　方法：從人新鮮臍帶血中分離出單個核細胞，經(jīng)尾靜脈注入經(jīng)亞致死劑量照射的NOD/SCID小鼠體內(nèi)，動態(tài)監(jiān)測小鼠造血系統(tǒng)重建情況。B95-8細胞經(jīng)培養(yǎng)后制備EB病毒，將1000TCID50劑量的EB病毒經(jīng)尾靜脈注入人源化NOD/SCID小鼠體

2、內(nèi)，動態(tài)監(jiān)測小鼠外周血象的變化，利用PCR、RT-PCR、免疫組化、流式細胞術(shù)、ELISA等實驗方法對EBV-HLH小鼠模型進行分析，采用秩和檢驗、Fisher確切概率法以及Logistic多因素回歸方法分析與預后相關(guān)的危險因素。
　　結(jié)果：NOD/SCID小鼠在單個核細胞移植后2-3周，外周血象基本恢復到照射前水平，其中血紅蛋白恢復最快，血小板恢復最慢，白細胞均數(shù)為1.89±0.25×109/L，血紅蛋白均數(shù)為156.3±4.6

3、7g/L，血小板均數(shù)為132±11.1×109/L。移植后第4周，小鼠的外周血中可以檢測到人特異性Alu基因序列和人源化的CD45+細胞。人源化NOD/SCID小鼠注射EB病毒后，出現(xiàn)脾大、貧血、血小板低、高細胞因子血癥、低白蛋白血癥等，免疫組化可見肝脾中有大量CD8+T細胞廣泛浸潤，流式細胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)外周血中NK數(shù)量減少，HE染色和普魯士藍染色分析可在肝脾中發(fā)現(xiàn)噬血細胞現(xiàn)象，小鼠外周血中可檢測到高滴度的EBV-DN A。經(jīng)秩和檢驗與F

4、is her確切概率法分析死亡組與存活組小鼠的的多項實驗室指標發(fā)現(xiàn)，白細胞、血小板、IFN-γ、血清白蛋白和EBV-DNA差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Logistic多因素分析顯示，血清白蛋白<30 g/L是小鼠死亡的獨立危險因素（P=0.013）。
　　結(jié)論：人臍帶血單個核細胞移植入NOD／SCID小鼠2-3周后，其造血系統(tǒng)能有效重建；EB病毒是噬血細胞綜合征的一個重要的觸發(fā)因素；本實驗成功建立了EBV-HPS小鼠模型，為

5、我們下一步探討EB病毒觸發(fā)HPS的機制研究提供工具；血清白蛋白降低是影響預后的獨立危險因素，提示動態(tài)監(jiān)測血清白蛋白水平可能有助于臨床實踐中實時觀測患兒病情變化。
　　第二部分兒童噬血細胞綜合征預后因素分析
　　目的：分析噬血細胞綜合征（HPS）患兒的臨床特點和預后危險因素。
　　方法：回顧性分析28例HPS患兒的臨床表現(xiàn)及相關(guān)實驗室指標，采用Logistic多因素回歸方法分析與預后相關(guān)的危險因素。
　　結(jié)果：HP

6、S患兒以持續(xù)高熱（100％）、肝腫大（64.29%）為突出表現(xiàn)，可伴有其他臨床表現(xiàn)如呼吸系統(tǒng)癥狀（53.57%）、脾腫大（50%）、多漿膜腔積液（42.86%）、淋巴結(jié)腫大（32.14%）、黃疸（17.86%）、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀（14.29%）、皮疹（14.29%）和消化道出血（10.71%）。實驗室檢查以全血細胞減少、肝功能損害、凝血功能障礙、高甘油三酯血癥、自然殺傷（NK）細胞數(shù)量降低及低鈉血癥等為主。病因分析顯示，感染相關(guān)性HPS

7、17例（60.71%），其中以EB病毒相關(guān)性HPS最多（11例，感染相關(guān)性HPS的64.71%）。經(jīng)秩和檢驗與Fis her確切概率法分析死亡病例與存活病例的多項實驗室指標和臨床表現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，血清白蛋白、尿素氮和活化部分凝血活酶時間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Logistic多因素分析顯示，血清白蛋白<35 g/L是HPS患兒死亡的獨立危險因素（OR=41.33，P=0.026）。
　　結(jié)論：HPS病因復雜，臨床表現(xiàn)多樣，病情進