慢性高眼壓下兔視網(wǎng)膜組織蛋白質(zhì)組變化的初步研究.pdf

1、目的：本研究在建立兔慢性高眼壓動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，采用雙向電泳（two-dimensional gel electrophoresis，2-DE）和液相色譜芯片串聯(lián)質(zhì)譜（LC-CHIP-MS/MS）分析技術(shù)，研究慢性高眼壓下的視網(wǎng)膜組織蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化，為青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（retinal ganglioncells，RGCs）的損傷機(jī)制和防治研究提供新的思路。
　　 方法：1.動(dòng)物模型的建立：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物左眼前房?jī)?nèi)注入0.2

2、ml復(fù)方卡波姆溶液制作成慢性高眼壓模型，右眼為正常對(duì)照眼。慢性高眼壓模型以眼壓>22 mmHg并能持續(xù)1周為標(biāo)準(zhǔn)。如眼壓<22 mmHg，7 d后按上述方法重復(fù)注藥1次。造模成功后每周測(cè)2次眼壓。在造模后28d摘除動(dòng)物眼球，取視網(wǎng)膜組織，提取視網(wǎng)膜組織蛋白質(zhì)。
　　 2.2-DE：根據(jù)Bio-Rad雙向電泳實(shí)驗(yàn)指南進(jìn)行。2-DE的分離結(jié)果用經(jīng)典質(zhì)譜兼容銀染法染色后進(jìn)行圖像掃描，以PDQest7.4.0圖像分析軟件分析凝膠并尋找差

3、異點(diǎn)。根據(jù)差異分析結(jié)果，兩種樣品中的同一種蛋白質(zhì)如存在1.5倍以上的光密度差異，則視為具有表達(dá)量的差異。
　　 3.經(jīng)LC-CHIP-MS/MS分析，得到肽指紋圖譜（peptide massfingerprinting，PMF，），使用Mascot軟件在Swissprot數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索鑒定差異表達(dá)蛋白質(zhì)，并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
　　 結(jié)果：1.慢性高眼壓組兔眼壓（intraoculaur pressure，IOP）術(shù)后3h

4、開(kāi)始升高，術(shù)后14 d左右達(dá)到40 mmHg以上，之后，大多數(shù)兔眼壓維持在30～40 mmHg；正常對(duì)照組兔眼壓在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)升高，平均為13～15 mmHg。
　　 2.慢性高眼壓誘導(dǎo)視網(wǎng)膜組織9個(gè)蛋白點(diǎn)出現(xiàn)差異表達(dá)，其中3個(gè)蛋白點(diǎn)出現(xiàn)明顯差異表達(dá)（均為上調(diào)）。LC-CHIP-MS/MS鑒定出3個(gè)蛋白質(zhì)為：熱休克蛋白70（heat shock70 kD protein，HSP70），丙酮酸激酶（Pyruvate kinas