肝細(xì)胞癌中TMS1基因甲基化的研究.pdf

1、背景:
　　 肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)的發(fā)生是一個遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)調(diào)節(jié)的多基因級聯(lián)過程，這一過程表現(xiàn)為癌基因激活和（或）抑癌基因的失活。除遺傳學(xué)變化外，在腫瘤的發(fā)生過程中表觀遺傳機(jī)制也起著非常重要的作用。表觀遺傳改變的兩個最主要機(jī)制就是DNA甲基化和組蛋白修飾。其中DNA甲基化狀態(tài)受到DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNAmethyltransferase，DNMTs)的調(diào)控。其中DNMT1為維持型

2、甲基轉(zhuǎn)移酶，作用是識別子代DNA雙鏈中親代單鏈上已甲基化的CpG位點(diǎn)，然后催化互補(bǔ)單鏈的胞嘧啶發(fā)生甲基化。此外，DNA甲基化結(jié)合蛋白(methyl-CpGbindingdomain，MBD)為細(xì)胞中促發(fā)甲基化作用的蛋白之一。其中MBD2蛋白通過選擇性結(jié)合甲基化的DNA，與其他相關(guān)蛋白協(xié)同參與甲基化有關(guān)的轉(zhuǎn)錄阻遏、染色質(zhì)構(gòu)型和基因轉(zhuǎn)錄。甲基化相關(guān)沉默目標(biāo)-1(targetofmethylation2inducedsilencing1，TM

3、S1)是一種較新的CpG島相關(guān)的抑癌基因，具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)NF-γB活性和活化caspase等多種功能。已有研究證明TMS1在多種惡性腫瘤的發(fā)生中起著重要的作用。
　　 目的:
　　 為了探討DNA甲基化異常在HCC發(fā)病中的作用及機(jī)制，本文主要檢測HCC患者血清TMS1基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)，MBD2基因和DNMT1基因的表觀遺傳學(xué)變化，以及組蛋白修飾與肝癌的關(guān)系。探討HCC患者TMS1基因啟動子甲基化的臨床早期診

4、斷意義。
　　 方法:
　　 采集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院2009年～2011年的48例HCC患者手術(shù)切除標(biāo)本及相應(yīng)非腫瘤肝組織(＞3cm)標(biāo)本。-80℃冰箱保存。采用甲基化特異性PCR(MethylationspecificPCR，MSP)檢測37例HCC患者、26例乙肝患者和23例正常人群外周血血清中TMS1基因啟動子甲基化情況;運(yùn)用免疫組織化學(xué)法(Immunochistochemistry，IHC)檢測48例HCC患者肝組

5、織及及相應(yīng)非腫瘤肝組織(＞3crn）中TMS1、MBD2和DNMT1蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 HCC患者、乙型肝炎患者血清TMS1基因甲基化檢出率為70.30％(11/37)、50.00％(13/26)，而正常對照組的血清未檢測出，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。TMS1在癌、癌旁正常肝組織中的陽性表達(dá)率分別為26.08％(10/48)、97.92％(47/48);MBD2分別為18.75％(9/48)、80％(38/48)

6、;DNMT1分別為77.08％(37/48)、32.25％(15/48)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。數(shù)據(jù)顯示在HCC血清中TMS1基因異常甲基化與TMS1蛋白表達(dá)之間有著密切的關(guān)系（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 在HCC發(fā)生發(fā)展過程中，TMS1基因的高甲基化與TMS1蛋白表達(dá)下降相關(guān)，這表明TMS1的異常甲基化可以誘導(dǎo)活體內(nèi)基因沉默。實(shí)驗(yàn)表明TMS1基因CpG島甲基化是在HCC肝癌組織中發(fā)生的，正常組織沒