七氟烷預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　采用大腦中動(dòng)脈阻塞法制備局灶性腦缺血再灌注模型，觀察七氟烷預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷是否具有保護(hù)作用，并探討大腦皮質(zhì)C/EBP同源蛋白(C/EBPhomologousprotein，CHOP)在七氟烷預(yù)處理減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷中的意義。
　　方法:
　　雄性Sprague-Dawley大鼠108只，體重250～280g，隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組(S組)、缺血再灌注組(I/R組)和七氟烷預(yù)處理

2、組(Sevo-pc組)。每組大鼠36只，又隨機(jī)分為再灌注12h、24h、72h3亞組，每亞組大鼠12只。大鼠麻醉后，分離并結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈，經(jīng)頸總動(dòng)脈向頸內(nèi)動(dòng)脈插入線栓，稍遇阻力即停止插入，阻斷大腦中動(dòng)脈血流1h后恢復(fù)再灌注，制備局灶性腦缺血再灌注模型。Sevo-pc組大鼠于缺血前1h持續(xù)吸入2.7％七氟烷；S組分離并結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈，不置入線栓。再灌注12h、24h、72h時(shí)Longa神經(jīng)功能缺陷評(píng)分完成后，各亞組

3、隨機(jī)取6只大鼠斷頭取腦，2，3，5-三苯基氯化四氮唑(2，3，5-tfiphenyhetrazoliumchloride，TTC)染色測(cè)定腦梗死體積比。各亞組余6只大鼠行心臟灌注后斷頭取腦，冠狀切取缺血腦組織，常規(guī)行脫水、透明、浸蠟及包埋。蘇木精-伊紅(hematoxylinandeosin，HE)染色觀察缺血側(cè)皮質(zhì)組織形態(tài)學(xué)特征，免疫組織化學(xué)染色測(cè)定缺血側(cè)皮質(zhì)周圍CHOP蛋白表達(dá)，脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記(termi

4、naldeoxynucleotidyltransferasemediatedbiotin-dUTPnickendlabeling，TUNEL)法計(jì)數(shù)凋亡神經(jīng)細(xì)胞。
　　結(jié)果:
　　1.成功制作大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。
　　2.神經(jīng)功能缺陷評(píng)分：S組大鼠未見(jiàn)神經(jīng)功能缺損。與S組比較，I/R組和Sevo-pc組神經(jīng)功能缺陷評(píng)分顯著升高(P<0.01)。與I/R組比較，Sevo-pc組神經(jīng)功能缺陷評(píng)分降低(P<0.05)

5、。
　　3.HE染色：S組大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞層次清晰，細(xì)胞數(shù)量多、形態(tài)正常；I/R組再灌注12h時(shí)出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞水腫、變性。再灌注24h時(shí)細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞縮小變形，胞質(zhì)濃縮，胞核固縮、碎裂、溶解。再灌注72h時(shí)細(xì)胞壞死明顯，膠質(zhì)細(xì)胞增生；Sevo-pc組再灌注各時(shí)間點(diǎn)大腦皮質(zhì)病理變化較I/R組明顯減輕，細(xì)胞排列尚規(guī)則。
　　4.TTC染色：S組未見(jiàn)腦梗死灶。與S組比較，I/R組和Sevo-pc組腦梗死體積比顯著升高(P<

6、0.01)。與I/R組比較，Sevo-pc組腦梗死體積比降低(P<0.05)。再灌注24h時(shí)，I/R組和Sevo-pc組腦梗死體積比最高(P<0.05)。
　　5.免疫組織化學(xué)染色：與S組比較，I/R組和Sevo-pc組大腦皮質(zhì)CHOP蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。與I/R組比較，Sevo-pc組大腦皮質(zhì)CHOP蛋白表達(dá)下調(diào)(P<0.05)。再灌注24h時(shí)，I/R組和Sevo-pc組大腦皮質(zhì)CHOP蛋白表達(dá)水平最高(P<0.05)

7、。
　　6.TUNEL染色：與S組比較，I/R組和Sevo-pc組大腦皮質(zhì)凋亡細(xì)胞數(shù)顯著增加(P<0.01)。與I/R組比較，Sevo-pc組大腦皮質(zhì)凋亡細(xì)胞數(shù)減少(P<0.05或0.01)。再灌注24h時(shí)，I/R組和Sevo-pc組大腦皮質(zhì)凋亡細(xì)胞數(shù)最多(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.細(xì)胞凋亡參與了腦缺血再灌注損傷的病理過(guò)程。
　　2.七氟烷預(yù)處理具有抑制大鼠局灶性腦缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。