CCR5自體多肽疫苗的構(gòu)建及其免疫原性的研究.pdf

1、本試驗(yàn)設(shè)計(jì)并構(gòu)建了人趨化因子受體5(chemokinereceptor5,CCR5)自體多肽疫苗，應(yīng)用原核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)，對(duì)表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行純化，復(fù)性。以得到重組蛋白作為候選疫苗免疫動(dòng)物，收集抗血清，研究和比較抗血清的生物學(xué)活性，篩選出一種蛋白作為CCR5自體疫苗，為構(gòu)建CCR5自體多肽疫苗以進(jìn)行艾滋病疫苗研究進(jìn)行初步的研究。 首先根據(jù)對(duì)CCR5分子的結(jié)構(gòu)的分析，設(shè)計(jì)了2種候選CCR5自體疫苗，它們分別是CCR5胞外段4個(gè)片

2、段用linker(GGGGS)連接的串聯(lián)體(命名為：rCCR5，recombinantCCR5)，以及氨基端插入PADRE(panHLADR-bindingepitope，人工合成的Th表位)片段的rCCR5命名為：PADRE-rCCR5。同時(shí)根據(jù)計(jì)算機(jī)抗原表位預(yù)測(cè)，獲得了CCR5兩個(gè)抗原表位，分別命名為C1,C2，GST作為良好的抗原蛋白載體，常常和抗原表位融合表達(dá)作為疫苗抗原。所以，同時(shí)設(shè)計(jì)GST-C1和GST-C2兩個(gè)融合蛋白作為

3、候選疫苗。 根據(jù)候選疫苗的設(shè)計(jì)，依據(jù)大腸桿菌偏愛的密碼子，合成了rCCR5基因，應(yīng)用PCR方法獲得了C1,C2抗原表位的基因，含有PADRE基因的克隆載體由我室構(gòu)建并保存。目的基因被分別克隆入相應(yīng)的表達(dá)載體，4種蛋白都成功地在大腸桿菌中得到了表達(dá)，裂菌顯示GST-C1與GST-C2以部分可溶性的形式存在，而PADRE-rCCR5和rCCR5以包涵體形式存在。我們利用GST親和柱對(duì)2個(gè)GST融合蛋白進(jìn)行了純化，應(yīng)用包涵體洗滌，凝膠

4、色譜層析，和透析復(fù)性的方法獲得了包涵體蛋白PADRE-rCCR5和rCCR5的純化和復(fù)性。純化后的4種候選疫苗：PADRE-rCCR5，rCCR5，GST-C1，GST-C2分別免疫小鼠，免疫抗血清滴度ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示：四種蛋白均能誘導(dǎo)出高滴度的抗體，其中以PADRE-rCCR5蛋白免疫效果最好，抗血清滴度達(dá)到1：100000以上，進(jìn)一步用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PADRE-rCCR5抗血清對(duì)表達(dá)CCR5的U937細(xì)胞系的結(jié)合試驗(yàn)顯示，平均