PPARγ、VEGF、VEGFC在人胃癌的表達(dá)以及羅格列酮對胃癌細(xì)胞生長、新生血管形成和淋巴管形成的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的：研究PPARγ、VEGF、VEGF-C在人胃癌組織中表達(dá)的意義和三者之間的相關(guān)性；探討PPARγ在胃癌細(xì)胞株MKN-45、MKN-28中的表達(dá)；PPARγ配體羅格列酮抑制胃癌細(xì)胞的分化，誘導(dǎo)凋亡作用；羅格列酮對VEGF和VEGF-C表達(dá)的影響，了解PPARγ激動劑對胃癌血管和淋巴管增生的抑制作用。 方法：分別采用ABC和SP法免疫組織化學(xué)方法，測定40例胃癌手術(shù)標(biāo)本中PPARγ、VEGF、VEGF-C表達(dá)，同時選取相同病例

2、的癌旁組織，癌旁正常組織作為對照研究；采用RT-PCR方法測定36例胃癌手術(shù)標(biāo)本中PPARγ、VEGF、VEGF-C的表達(dá)，同時選取相同病例的胃正常組織作為對照：采用RT-PCR法檢測PPARγ在胃癌細(xì)胞MKN-45和MKN-28中的表達(dá)；采用不同濃度的羅格列酮作用24h、48h、72h干預(yù)胃癌細(xì)胞的生長，MTT法檢測羅格列酮對不同分化程度胃癌細(xì)胞增殖活性的效應(yīng)；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測羅格列酮對兩種細(xì)胞的凋亡和周期的影響；實時熒光定量PCR

3、檢測不同濃度羅格列酮在不同時間點對胃癌細(xì)胞MKN-45的VEGF和VEGF-C表達(dá)的影響；采用Westem-bloting檢測不同濃度的羅格列酮作用MKN-45細(xì)胞48小時對VEGF蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。 結(jié)果：免疫組化提示PPARγ陽性率在胃癌中是。72.5％，癌旁組織中是25％，癌旁正常組織中是17.5％，三者表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義；VEGF陽性率在胃癌中是75％，癌旁組織中是40％，癌旁正常組織中是10％，三者表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)

4、意義；VEGF-C陽性率在胃癌中是55％，癌旁組織中是10％，癌旁正常組織中是7.5％，三者表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。PPARγ的蛋白表達(dá)與VEGF表達(dá)有關(guān)(r=0.388，p=0.013)，與VEGF-C的表達(dá)有關(guān)(r=0.441，p=0.004)；RT-PCR提示PPARγmRNA在胃癌中是1.17±0.10，癌旁正常組織中是0.79d：0.23，二者表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義；VEGF在胃癌中是1.02±0.25，癌旁正常組織中是0.65±

5、0.11，二者表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。VEGF-C在胃癌中是2.107±0.52，癌旁正常組織中是0.62±0.17，二者表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。PPARγmRNA的表達(dá)與VEGF表達(dá)有關(guān)(t=3.24，p=0.003)，與VEGF-C的表達(dá)有關(guān)(t=2.624，p=0.014)；RT-PCR方法檢測到PPARγ、VEGF、VEGF-C在胃癌細(xì)胞MKN-45和MKN-28中有表達(dá)；MTT方法檢測到羅格列酮對MKN-45和MKN-28的增殖影

6、響有濃度和時間依賴性；流式細(xì)胞術(shù)檢測到羅格列酮能夠誘導(dǎo)MKN-45和MKN-28凋亡，凋亡率有濃度依賴性，細(xì)胞周期停滯在G1期；實時熒光定量PCR的結(jié)果表明：不同濃度的羅格列酮作用24h、48h、72h對胃癌MKN-45細(xì)胞VEGF、VEGF-C表達(dá)下調(diào)有劑量依賴性；采用Western-blotting方法結(jié)果顯示不同濃度羅格列酮作用MKN-45細(xì)胞48h可以影響VEGF的表達(dá)，并且有濃度依賴性。 結(jié)論：PPARγ激動劑羅格列酮