Noscapine聯(lián)合Cisplatin誘導(dǎo)骨肉瘤MG-63增殖抑制和細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、骨肉瘤是兒童和青少年最常見的起源于間充質(zhì)細(xì)胞的惡性骨腫瘤。隨著骨肉瘤治療手段的進(jìn)展，如擴(kuò)大切除術(shù)、放療和新輔助化療，其5年生存率已經(jīng)增加到50—60％。以鉑類為基礎(chǔ)的藥物，如順鉑(cisplatin)，是骨肉瘤化療常用的有效的藥物。為了提高骨肉瘤患者的總的生存率，進(jìn)一步研究新的有效的治療方法是必要的，比如新的化療藥，介入治療和基因治療。而進(jìn)一步提高骨肉瘤治療效果的關(guān)鍵則在于加強(qiáng)基礎(chǔ)研究，對(duì)其發(fā)病機(jī)理和分子生物學(xué)特性的進(jìn)一步闡明可以進(jìn)一步

2、推動(dòng)新型的分子水平的靶向治療藥物的發(fā)展和新的治療方案的產(chǎn)生。過去幾十年中，諾斯卡品(noscapine)-直被用作鎮(zhèn)咳藥。近年來發(fā)現(xiàn)諾斯卡品及其衍生物可作用于微管，抑制其動(dòng)態(tài)不穩(wěn)定性，從而干擾腫瘤細(xì)胞的有絲分裂，能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖和血管生成，并誘導(dǎo)凋亡。諾斯卡品在腫瘤細(xì)胞和動(dòng)物腫瘤模型的實(shí)驗(yàn)研究中表現(xiàn)出良好的抗腫瘤活性，能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖和血管生成，并誘導(dǎo)凋亡，表現(xiàn)出良好的抗腫瘤活性，更為重要的在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中，各種劑量的諾

3、斯卡品對(duì)組織或器官無任何明顯的毒副作用，對(duì)體液免疫和組織也沒有明顯的抑制作用。其作用機(jī)制仍然沒有完全闡明，正是本實(shí)驗(yàn)的研究目的所在。
　　 目的：諾斯卡品是一種來自于罌粟屬鴉片的鄰苯二甲酸異喹啉生物堿。在過去幾十年中一直被用作鎮(zhèn)咳藥，亦有治療卒中和水腫的報(bào)道，而且諾斯卡品無鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜和呼吸抑制等藥理作用。已經(jīng)有實(shí)驗(yàn)證實(shí)諾斯卡品對(duì)多種腫瘤細(xì)胞和動(dòng)物腫瘤模型中具有良好的抗腫瘤活性。本實(shí)驗(yàn)的目的是研究諾斯卡品對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞的增殖抑制和

4、誘導(dǎo)凋亡作用，并探討其機(jī)制。
　　 方法：不同濃度的諾斯卡品(50，100，200μmol/L)和/或順鉑(10μg/ml)作用于人類骨肉瘤MG-63細(xì)胞系24，48小時(shí)，選用各種方法觀察形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)特性的改變。細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)(MTT方法)觀察不同濃度諾斯卡品聯(lián)合順鉑對(duì)MG-63細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測諾斯卡品及聯(lián)合順鉑誘導(dǎo)MG-63細(xì)胞的凋亡；蛋白免疫印跡法(Western Blotting)檢測不同藥物處理后一

5、些凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化，包括Bax，Bcl-2，survivin，caspase-3等。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS13.0軟件完成，計(jì)量資料數(shù)據(jù)表示方式以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)，兩組計(jì)量資料采用非獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，各組指標(biāo)間的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性意義。
　　 結(jié)果：骨肉瘤MG-63細(xì)胞經(jīng)過諾斯卡品(50，100，200μmol/L)和/或Cisplatin(10μg/m

6、l)處理24，48h后，細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)(MTT)證實(shí)諾斯卡品和順鉑均能夠抑制MG-63細(xì)胞的增殖，并且諾斯卡品呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)。諾斯卡品聯(lián)合順鉑對(duì)MG-63細(xì)胞的生長具有協(xié)同抑制作用。倒置顯微鏡觀察藥物干預(yù)后的MG-63細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞體積變小、皺縮、變圓、脫落。利用流式細(xì)胞儀分析藥物作用后的MG-63細(xì)胞，檢測到Gl期阻滯和凋亡，并且諾斯卡品(100μmol/L)和順鉑(10μg/ml)聯(lián)合的凋亡率明顯的高于其他的實(shí)驗(yàn)組。Westem

7、 Blot結(jié)果顯示諾斯卡品聯(lián)合順鉑可以明顯降低survivin、bcl-2的表達(dá)，以及檢測到caspase-3，PARP的裂解片段表達(dá)的變化，JNK途徑的標(biāo)志性蛋白p-c-jun表達(dá)上調(diào)，ERK MAPK途徑標(biāo)志性蛋白p-erk表達(dá)下調(diào)。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)以人骨肉瘤細(xì)胞系MG-63為對(duì)象，研究諾斯卡品對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。研究表明諾斯卡品可以明顯抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖并促進(jìn)凋亡。其作用可能與JNK途徑的激活有關(guān)，