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1、本次研究既將pUCY-SARS質(zhì)粒中含有的SARS病毒S蛋白基因的部分序列，分別在大腸桿菌BL21和家蠶細(xì)胞以及家蠶幼蟲體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)?！ ≡诖竽c桿菌表達(dá)系統(tǒng)中首先將S蛋白基因克隆到大腸桿菌表達(dá)載體pET28a(+)構(gòu)建獲重組大腸桿菌載體pET28a-S，將pET28a-S在大腸桿菌BL21中利用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。 在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中將S蛋白基因克隆到桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pBacPAK-His中，構(gòu)建重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pBacP
2、AK-S，重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pBacPAK-S與線性化桿狀病毒BmBacPAK-6共轉(zhuǎn)染BmN細(xì)胞，經(jīng)篩選獲得重組桿狀病毒BmBac-S，并將其在細(xì)胞和家蠶中進(jìn)行表達(dá)?！ ”磉_(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE、WesternBlotting分析表明，大腸桿菌和家蠶中的表達(dá)產(chǎn)物的分子量分別為27kDa和30kDa左右，重組病毒感染后的第5天達(dá)到最高表達(dá)水平，約占血淋巴總蛋白的1.2％。另外利用金屬螯合親和層析純化方法對BmN細(xì)胞中的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行
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